科研产出
木薯AGPase大亚基MeAGPL3基因启动子调控区域鉴定
《分子植物育种 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：木薯是重要的热带作物,具有高淀粉积累等特点,但其高效积累机制尚不明确。为研究腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）大亚基对木薯淀粉积累的调控作用,本研究通过RT-PCR技术对木薯AGPase5个大亚基基因（MeAGPL1～MeAGPL5）进行筛选,发现MeAGPL3基因在木薯块根中高表达且受100μmol/L外源ABA正向调控;克隆了该基因2 455 bp 5’侧翼序列,利用该序列及4个不同长度的5’端截短片段分别与β-葡萄糖醛酸酶（GUS）基因融合构建表达载体,转化本氏烟草,通过检测各转基因烟草GUS蛋白活性,发现-1至-1 711 bp序列具有最佳的启动活性。利用100μmol/L外源ABA处理各转基因烟草株系,分析处理前后GUS蛋白活性变化,发现ABA信号响应元件分布于-1 711至-2 150区域。本研究为从转录调控角度阐释木薯淀粉高效积累机制提供理论支撑。
关键词： 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 MeAGPL3 启动子 5’端截短 GUS蛋白
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橡胶树红根病病原菌LAMP检测方法的建立及应用
《热带作物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：由灵芝菌（Ganodermapseudoferreum）引起的红根病是橡胶上危害面积最广、影响最大的世界性根部传染性病害。本研究利用环介导等温扩增技术（LAMP）,以G. pseudoferreum线粒体Large rDNA特异片段为靶标序列,设计出G.pseudoferreum特异性LAMP引物,以SYBRGreenI为指示剂,建立基于颜色判断的直观、快速、灵敏的G.pseudoferreum LAMP检测方法,优化了反应体系和条件,进行了特异性、灵敏度及田间疑似病样的检测验证。结果表明:整个试验检测时间仅需80 min,在等温64℃条件下反应1 h能特异性检测出G. pseudoferreum;特异性检测中,G.pseudoferreum菌株扩增后呈阳性（绿色）,而其他真菌均为阴性（橙色）。该技术最低检测限为1×10-5 ng/μL。田间疑似病样LAMP体系检测,病原检出率为85%。本研究建立的LAMP检测技术为橡胶树红根病菌的快速鉴定提供了新技术。
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杧果DBB基因鉴定及其在胶孢炭疽菌和细菌性黑斑病菌侵染过程中的表达分析
《农业生物技术学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：B-box蛋白是一类锌指结构转录因子,其功能具有普遍性和特异性。为了揭示双B-box结构域锌指蛋白（double B-box, DBB）基因家族在杧果（Mangifera indica）中的序列特征及其表达特性,本研究以杧果全基因组数据为基础,采用生物信息学的方法对杧果DBB基因家族成员进行序列分析,并通过qRT-PCR技术研究杧果胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides, Cg）和细菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris pv. mangiferaeindicae, Xcm）侵染过程中杧果DBB基因家族成员的相对表达量。结果表明,从杧果基因组中鉴定了9个DBB基因家族成员,命名为MiDBB1～9,9个MiDBBs蛋白均为不稳定亲水酸性蛋白,主要定位于细胞核中,不仅三级结构类似,N端还具有相同位点的两个保守结构域（B-box1和Bbox2）。根据蛋白结构预测、系统发育关系、保守基序及多重序列比对分析推测,杧果DBB基因家族在进化上具有结构保守性,功能上具有相似性。杧果与拟南芥（Arabidopsis thaliana）、烟草（Nicotiana tabacum）、苹果（Malus domestica）、菠萝（Ananas comosus）和毛果杨（Populus trichocarpa）构建的系统发育树显示,杧果DBB与毛果杨DBB亲缘关系最近,其次是苹果。qRT-PCR结果显示,胶孢炭疽菌侵染过程中,MiDBB1～9的相对表达量在12～48 h内持续上调,细菌性黑斑病菌侵染过程中,MiDBB2和MiDBB3的相对表达量在12～72 h内持续上调,初步确定了杧果DBB基因表达受胶孢炭疽菌和细菌性黑斑病菌的诱导。本研究结果为后续研究杧果DBB基因家族成员的功能和作用机制提供参考。
关键词： 杧果 双B-box结构域锌指蛋白（DBB）基因家族 全基因组鉴定 表达分析
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QuEChERS-气相色谱-串联质谱法同时测定豇豆中6种菊酯农药残留
《中国测试 》 2021 北大核心
摘要：建立QuEChERS-气相色谱-串联质谱技术同时测定豇豆中6种菊酯农药（甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氟胺氰菊酯、氰戊菊酯）含量的快速检测方法。豇豆样品经乙腈提取,采样QuEChERS法进行净化,目标化合物经TG-5SILMS（30 m×0.25 mm,0.25μm）色谱柱分离,采用三重串联四级杆选择反应监测模式（selected reaction monitoring, SRM）进行定性定量分析,外标法定量。结果表明,6种农药在0.001～0.5 mg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99;在3个添加浓度水平（0.01,0.05,0.10 mg/kg）下,平均回收率在89.6%～106.9%之间;5次重复的相对标准偏差在4.0%～11.9%;甲氰菊酯、氟氯氰菊酯和氰戊菊酯的定量限为0.003 mg/kg,氯氟氰菊酯、氯氰菊酯和氟胺氰菊酯的定量限为0.0015 mg/kg。该方法操作简便,结果准确,能满足豇豆中6种菊酯农药残留检测的要求。
关键词： 豇豆 菊酯农药 气相色谱-串联质谱 QuEChERS
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海南桑树青枯病病原菌鉴定及其分子鉴定
《热带作物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：桑树青枯病是由青枯雷尔氏菌引起的细菌性病害,热带、亚热带地区发病严重,严重影响蚕桑产业的可持续发展。雷尔氏菌不同种间致病力和宿主各不相同,其防治策略也相应不同,准确地分离鉴定病原菌是青枯病有效防控的先决条件。本研究采集、分离了海南省琼中县桑青枯病发病桑园（‘桂桑优62’）桑树根部、茎部病原菌,并通过致病性、生理小种、生化变种测定,结合16SrDNA、特异性引物、复合PCR检测体系、序列变种等分子鉴定方法初步确定了病原菌的种类和分类地位。结果表明,引发海南省琼中县桑青枯病的病原菌属于青枯雷尔氏菌（Ralstoniasolanacearum）、生理小种5（race 5）、生化变种Ⅴ（biovarⅤ）,病原菌遗传进化分析结果显示病原菌属演化型Ⅰ（phylotypeⅠ）即亚洲分支菌株,序列变种12（sequevar 12）。这些结果将为海南桑青枯病的有效防控奠定基础。
关键词： 桑树青枯病 病原鉴定 雷尔氏菌 分子鉴定 系统发育
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漆酶基因Cglac10的缺失对杧果炭疽病菌无性繁殖和侵染能力的影响
《果树学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】揭示漆酶基因Cglac10在杧果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）生长及侵染致病过程中的功能。【方法】利用qPCR技术对Cglac10在该菌侵染过程中的表达进行分析,并通过同源重组和PEG介导的原生质体转化法获得敲除突变体ΔCglac10H和回复菌株C-ΔCglac10H。【结果】Cglac10基因在侵染过程中的表达量是侵染前的8.02～13.66倍。回复菌株C-ΔCglac10H的表型与野生型菌株的无显著差异;突变体ΔCglac10H除在菌丝生长速率方面与野生型菌株差异不明显外,菌落颜色变为白色,培养10 d时菌丝中黑色素含量下降了67.33%,产孢量显著下降;在水膜中培养至24 h时,ΔCglac10H才偶见形成附着胞,36 h时的形成率仅为野生型菌株的44.85%;在PDB中培养6 d后,ΔCglac10H的胞内漆酶活性较野生型菌株下降了57.61%;不刺伤时,ΔCglac10H几乎不致病,刺伤接种6 d后,观察到ΔCglac10H的致病力比野生型菌株下降了52.94%。【结论】Cglac10在C. gloeosporioides无性繁殖及侵染致病过程中起着重要作用。
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海南热带雨林土壤真菌时空分布格局
《生态学杂志 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：土壤中微生物通过分解土壤中的有机残体为植物提供养分,在生态系统中起着重要的作用。为了明确海南岛热带雨林土壤真菌的组成及多样性时空分布特征,本研究以海南省五大热带雨林区——吊罗山、五指山、鹦哥岭、霸王岭和尖峰岭雨林旱季和雨季土壤真菌为对象,基于高通量基因测序技术分析土壤真菌群落组成与多样性时空分布格局。结果表明:热带雨林不同地点的真菌组成差异显著,不同季节的真菌多样性差异较大,全氮和全磷是影响旱雨季土壤真菌多样性的重要环境因子,解释率分别为13.07%和17.86%。热带雨林土壤真菌群落具有明显的时空分布特征,土壤养分是主要的驱动因子。
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油棕EgGRF转录因子家族的全基因组鉴定与表达分析
《热带作物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：生长调控因子（Growthregulatingfactor,GRF）是植物中重要的转录因子,参与植物生长、发育和逆境胁迫响应等多种生物学过程。本研究从油棕（Elaeisguineensis）基因组中鉴定出15个EgGRF基因家族成员,并对其理化性质、染色体定位、基因结构、保守功能域、进化关系、启动子顺式作用元件、组织表达模式和果肉不同时期表达模式进行分析。结果表明:EgGRF基因家族成员编码的肽链平均为409个氨基酸,分子量为27.62～65.51 kDa,等电点为6.24～9.38,蛋白不稳定指数为47.24～68.37,脂溶指数为47.52～67.69,总平均亲水性为–0.945～–0.400。EgGRF基因家族成员含有3～5个外显子,均含有特征结构域QLQ（Gln、Leu、Gln）和WRC（Trp、Arg、Cys）,基于系统进化关系将EgGRF家族分为5个亚族,油棕EgGRF的亲缘性与拟南芥较近。启动子上鉴定出大量植物激素响应、逆境胁迫响应、光响应和分生组织特异表达顺式作用元件。不同组织的转录组数据分析结果表明,EgGRF基因家族在茎尖和花中表达量较高,8个EgGRF在果肉的不同时期特异表达。本研究为进一步探索EgGRF调控油棕生长发育过程的机制奠定基础。
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南渡江农业土壤中农药分布特征与生态风险评估
《生态环境学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为摸清稻菜轮作土壤中农药（CUPs）残留特征与生态风险,采集海南岛南渡江流域稻菜轮作系统168个土壤样品,利用Qu ECh ERS-超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测土壤中25种CUPs残留水平,结合土壤因子与作物类型分析CUPs残留关键影响因素,以风险熵法评估其生态风险。结果表明,∑25 CUPs处于0.30μg·kg-1—11.625 mg·kg-1之间,吡虫啉、多菌灵检出率与质量分数最高;∑25CUPs呈现辣椒（Capsicumannuum L.）>大白菜（Brassicapekinensis L.）>豆角（Vigna unguiculata L.）>线瓜（Luffaacutangula L.）>水稻（Oryza sativa L.）>未种植趋势,CUPs残留种类与含量随作物类型显著不同。主成分分析显示,多菌灵、吡虫啉为主要杀菌剂与杀虫剂种类;冗余分析结果显示有机质、黑炭与其中多菌灵、甲基硫菌灵正相关,而土壤总氮、总磷、p H与CUPs残留量与种类相关性不高。从单一和联合风险熵（RQ）看,多菌灵、吡虫啉与甲基硫菌灵呈高生态风险,其高风险作物种类、采样期和区域为辣椒、7月及中游区域,而其他CUPs的RQ均小于1,无高生态风险。土壤中总CUPs、杀菌剂与杀虫剂的RQ均大于1,CUPs多残留生态风险不可忽略。研究结果可为今后稻菜轮作土壤农药污染监测与风险识别提供科学依据。
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高效氯氟氰菊酯在香蕉中的残留消解及膳食风险评估
《食品工业科技 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了探究高效氯氟氰菊酯在香蕉中的残留消解行为和膳食摄入风险,选择海南儋州（巴西蕉）、广西南宁（威廉斯香蕉）、云南玉溪（巴西蕉）、广东佛山（过山香）四个试验地进行田间试验,采用气相色谱对高效氯氟氰菊酯在香蕉全果及果肉中的残留消解结果进行测定,并对其长期膳食暴露风险进行评估。结果表明:高效氯氟氰菊酯标准曲线线性方程为y=155711x-387.55,R2=0.9997,在0.01～1 mg/kg的添加水平下,平均回收率为79%～110%,相对标准差（RSD）为2.2%～9.5%;在香蕉中的最低检出浓度为0.01 mg/kg;高效氯氟氰菊酯在香蕉中的消解动态符合一级动力学方程,半衰期为22.1 d,消解动态方程为C=0.12878e-0.03136t;评估结果显示高效氯氟氰菊酯的膳食风险概率为76.84%,表明香蕉中残留的高效氯氟氰菊酯长期摄入膳食风险可接受。
关键词： 高效氯氟氰菊酯 香蕉 残留消解 膳食风险评估 田间实验
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