科研产出
杧果炭疽病菌漆酶基因lac1的克隆与序列特征分析
《果树学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了探明胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)漆酶基因(lac1)的序列特征,进一步研究胶孢炭疽菌的分子致病机制,【方法】以杧果炭疽病菌为材料,采用同源克隆、SEFA-PCR和RT-PCR技术对lac1基因进行扩增、并对所获得的lacl基因进行了序列特征和预测蛋白保守结构域的分析。【结果】结果表明,该基因DNA和cD-NA全长分别为2 996 bp、1 773 bp,编码区含3个内含子(大小分别为47 bp、50 bp和59 bp),推测编码590个氨基酸,其分子质量约为1174.50 kDa,等电点PI为5.36。系统进化树结果显示该基因编码的氨基酸序列与多种真菌的含铜氧化物酶聚为一类,其中与C.lagenarium laccase(BAB32575.1)的同源性最高,达73%。【结论】lac1基因具备真菌漆酶基因家族的序列特征,推测lac1基因可能参与调控C.gloeosporioides菌丝生长、色素生成和致病性等。
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华南8号木薯及其四倍体诱导株系叶片蛋白质组及叶绿素荧光差异分析
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】通过对华南8号木薯及其四倍体诱导株系叶片差异蛋白质及叶绿素荧光参数的分析,在蛋白质水平上揭示两者叶片存在的差异以及其与光合效率间的关系。【方法】通过木薯嫩叶、根尖染色体压片及流式细胞观察对华南8号四倍体诱导株系进行鉴定,采用双向电泳技术分离叶片蛋白质,Delta 2D软件分析差异蛋白质并通过质谱技术鉴定,利用Western blot技术对部分差异蛋白质进行验证;采用95%乙醇直接提取法测定叶绿素含量,并用Imaging-Pam测定叶绿素荧光动力学参数。【结果】染色体压片及流式细胞结果均显示,诱导得到SC8多倍体株系为四倍体株系;得到的13个差异蛋白质点中上调表达12个,下调表达1个;经质谱技术成功鉴定到12个,其功能涉及碳代谢及能量代谢、光合作用、抗氧化、蛋白质代谢调控等;1个下调表达的蛋白质未得到成功匹配,其中参与光合作用的蛋白质占46.2%;四倍体株系叶片叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素均显著升高;叶绿素荧光参数,包括Fo、ΦPSII、qP、NPQ和ETR均显著升高;【结论】参与碳代谢及能量代谢、光合作用等途径相关蛋白质表达水平的上调;叶绿素含量及叶绿素荧光参数的升高;表明四倍体株系叶片PSII反应中心捕光能力强、光化学转化效率高,从而提高了叶片的光合速率。
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南方根结线虫食道腺表达基因7E12影响植物的初步研究
《中国农学通报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：南方根结线虫(Meloidogyne incognita)是一种重要的植物寄生线虫,它的食道腺产生的分泌蛋白是对寄主造成危害的致病因子。鉴定这些编译分泌蛋白的基因特性,是认知南方根结线虫对植物致病性或寄生性机理的关键所在。通过使用烟草根部特异表达基因TobRB7的△0.3缺失的启动子,替换植物过表达载体pBI-121的CMV(烟草花叶病毒)35S启动子,构建了南方根结线虫食道腺细胞表达的基因7E12的植物表达载体pBI-Trp-7E12和pBI-Trp。pBI-Trp在本研究中作为空白对照使用。利用农杆菌侵染花粉管通道法把这2个载体转化了模式植物拟南芥。通过利用卡那霉素抗性培养基对已转化的拟南芥进行筛选,获得了T1代转基因植株。这为研究鉴定该基因的特性奠定了基础,以利于进一步研究南方根结线虫对植物的致病性机理。
关键词： 南方根结线虫 食道腺分泌蛋白基因7E12 烟草根部特异表达基因启动子
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拮抗香蕉枯萎病菌的解淀粉芽孢杆菌LX1菌株的鉴定及其抗菌蛋白基因的克隆
《热带作物学报 》 2013 CSCD
摘要：收集海南不同盐碱地的土样进行拮抗香蕉枯萎病菌的微生物分离,对具有较强抑菌作用的菌株进行形态特征、生理生化和分子鉴定,并克隆其抗菌蛋白基因。结果分离到1株具有较强抑制香蕉枯萎病菌能力的细菌LX1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。抑菌实验发现LX1菌株的发酵上清液中粗蛋白有一定的抑菌作用,经过Sephacryl S-200HR柱层析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析分离纯化了其中抑菌作用最强的抗菌蛋白。质谱鉴定结果表明,抗菌蛋白与B.amyloliquefaciens FZB42内切葡聚糖酶同源性最高。根据质谱结果克隆了该抗菌蛋白的编码基因,该基因的核苷酸和氨基酸序列与B.amyloliquefaciens FZB42的内切葡聚糖酶的核苷酸和氨基酸序列同源性分别达99%和100%。拮抗香蕉枯萎病菌的芽孢杆菌LX1可作为潜在的防治香蕉枯萎病的的生防制剂,其抗菌蛋白基因也可通过遗传工程应用于香蕉枯萎病的防治。
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辣椒环斑病毒提纯及抗血清制备
《热带作物学报 》 2013 CSCD
摘要：为获得高效、灵敏的辣椒环斑病毒(Chilli ringspot virus,ChiRSV)多克隆抗体,通过差速离心、密度梯度离心等方法首次对辣椒环斑病毒进行了分离纯化,并将获得的高纯度病毒粒子用于免疫新西兰大白兔,制备了该病毒的多克隆抗血清。获得的抗血清经间接法酶联免疫吸附测定(ID-ELISA),效价高达1∶125 000,且特异性高,与黄灯笼辣椒中另一种亲缘关系很近的同属病毒辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)不发生血清交叉反应、可有效鉴别这2种Potyvirus病毒。获得的抗血清可用于ChiRSV的检测及后续实验,最适工作浓度在1∶5 000～1∶25 000之间。
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海南蔗区甘蔗黑穗病菌生理小种鉴定
《热带作物学报 》 2013 CSCD
摘要：采集海南蔗区8个县市24个乡镇的甘蔗黑穗病菌样品24份,通过甘蔗黑穗病菌鉴别寄主NCO376(免疫)、NCO310(抗小种2,感小种1)、F134(感小种2,抗小种1)、F173(高感)及主栽品种ROC22,确定海南蔗区甘蔗黑穗病菌的生理小种。接种甘蔗黑穗病菌后1 a新植,2 a宿根的发病情况表明:海南蔗区甘蔗黑穗病菌生理小种为小种2,或优势小种为小种2。这对了解海南蔗区甘蔗黑穗病菌生理小种的分化及分布情况,以及对今后海南蔗区甘蔗黑穗病的防控及抗黑穗病甘蔗种质的选育提供依据。
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巴西香蕉叶面积与叶片形态特征关系的定量分析
《热带作物学报 》 2013 CSCD
摘要：采用"3414"设计方案进行田间实验,在实验观测的基础上,建立了中肥不同生育期巴西香蕉叶面积与叶长、叶宽及长宽乘积之间的定量关系,结果表明:不同生育期,巴西香蕉叶面积与叶长、叶宽及长宽乘积最佳模型Y=ax+b,具体关系如下:在营养生长期中,叶面积与叶长、叶宽及长宽乘积间定量关系分别为:A=-2 162+54.957 L、A=-2 202.687+123.919 W、A=-76.014+0.767 P;孕蕾期及抽蕾期,叶面积与叶长、叶宽及长宽乘积间定量关系分别为:A=-6 969+90.584 L、A=-6 971+231.195 W、A=-38.177+0.778 P。经2012～2013年独立资料检验:营养生长期高、低肥叶面积的模拟值与观测值的差值标准误分别为298.098、356.456和232.127 cm2/株,孕蕾期及抽蕾期高、低肥叶面积的模拟值与观测值的差值标准误分别为1 134.310、3 584.610和1 306.924 cm2/株,检验结果表明:所建的香蕉叶面积模型可靠性均较好,具有一定的解释性和通用性,对香蕉理想株型设计、结构与功能关系研究及香蕉生长系统的可视化和数字化均有一定的参考价值。
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菠萝冠芽变异及鸡冠状冠芽遗传稳定性初步研究
《热带作物学报 》 2013 CSCD
摘要：考察了无刺卡因、巴厘和珍珠3个菠萝品种吸芽苗冠芽的变异情况,结果显示:无刺卡因冠芽全为单冠芽,巴厘和珍珠则存在冠芽变异,其中珍珠发生冠芽变异显著高于无刺卡因和巴厘,主要是因为珍珠的复冠率显著高于无刺卡因和巴厘,但3个品种鸡冠状冠芽发生率的差异未达到显著。利用从巴厘和珍珠中发现的3株鸡冠状冠芽及其母株再次繁育成苗,所有鸡冠状冠芽苗成熟时均未再现鸡冠状冠芽表型,表明鸡冠状冠芽不能稳定遗传,受环境影响。然而珍珠鸡冠状冠芽母株的吸芽苗却又再现复冠和鸡冠状冠芽,再次表明品种珍珠的吸芽易于产生冠芽变异。
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肿柄菊挥发油的化学成分分析及其化感作用
《广西植物 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：采用水蒸气蒸馏法提取肿柄菊地上部分的挥发油,利用GC-MS技术对肿柄菊地上部分的挥发油进行分析,以假臭草、巴西含羞草、含羞草、蝶豆和鬼针草5种肿柄菊伴生植物为供试植物,用半密闭容器法对肿柄菊挥发油的化感效应进行生物测定。GC-MS分析结果显示,从肿柄菊挥发油中鉴定出50个化合物,占总出峰面积的94.79%,肿柄菊挥发油中主要含有α-蒎烯(63.81%)、柠檬烯(7.07%)、β-石竹烯(4.85%)、双环大香烯(2.95%)、香桧烯(2.78%)、斯巴醇(2.70%)等萜类和醇类化合物,占挥发油总量的94.15%,其中萜类化合物含量占总挥发油的86.01%。生测结果显示,肿柄菊挥发油对5种受试植物的种子萌发和幼苗生长均产生抑制作用,其中对巴西含羞草的抑制作用最为显著,而对含羞草和蝶豆影响较小。说明肿柄菊挥发油在其入侵扩散中发挥一定的化感作用。
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