科研产出
兔源强毒力金黄色葡萄球菌环介导等温扩增快速检测方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的快速检测方法,本实验根据GenBank中登录的金黄色葡萄球菌pvl基因保守序列设计了2对引物,经反应条件优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。结果显示,该LAMP快速检测方法最优反应条件为:外引物和内引物的浓度比为1.7,反应温度为65℃,反应时间为60 min。利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取兔源强毒力金黄色葡萄球菌、低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌DNA,利用该方法检测,结果显示仅兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测为阳性结果,其他均为阴性,无交叉反应,该方法特异性较强;将兔源强毒力金黄色葡萄球菌基因组DNA的浓度设置为1×108拷贝/μL～1×100拷贝/μL,利用本研究建立的方法检测,结果显示对兔源强毒力金黄色葡萄球菌基因组DNA的最低检出限为1×102拷贝/μL,其敏感性为双重PCR方法的100倍,敏感性高;利用该方法进行批内和批间重复性试验,结果均一致,重复性较好。利用该方法检测88份临床样品,结果显示与已报道的双重PCR方法检测结果的符合率为100%。本研究在国内首次建立了兔源强毒力金黄色葡萄球菌LAMP方法,为该病原的快速检测提供了有效的技术手段。
关键词： 兔 强毒力金黄色葡萄球菌 pvl基因 LAMP检测方法
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福建地区葡萄自然发酵过程中酵母菌的组成及差异分析
《南方农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】对福建地区葡萄自然发酵酵母菌组成的差异进行分析,明确福建主要酵母菌种类,为酿制具有南方地域特色的葡萄酒提供优良菌株。【方法】采集夏黑、刺葡萄和玫瑰香葡萄自然发酵不同阶段[发酵前期（7 d）、中期（15 d）和后期（25 d）]的发酵液进行酵母菌分离,采用WL培养基进行酵母菌表型性状鉴别,挑取代表性菌株进行DNA提取及26S rDNA D1/D2鉴定,分析不同发酵阶段酵母菌的组成差异。通过测定相同发酵条件下的酒精度、总糖、还原糖和总酸含量,对酿酒酵母的酿酒性能进行初步分析。【结果】不同品种葡萄自然发酵的发酵液中共分离获得114株菌株,根据其表型鉴定为18个不同的表型类群。进一步通过酵母菌的26S r DNA D1/D2区序列测序,可将114株酵母菌菌株划分为18种,包括拜耳接合酵母（Zygosaccharomyces bailii）、双孢接合酵母（Zygosaccharomyces bisporus）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）等。不同品种葡萄发酵过程中酵母菌种类和组成具有一定的差异,其中刺葡萄A有10种、刺葡萄B有11种、夏黑A和玫瑰香均为7种、夏黑B有8种。陆生伊萨酵母（Issatchenkia terricola）出现在刺葡萄A、玫瑰香和夏黑B发酵前期,且所占比例最高,分别达100.00%、50.00%和40.00%;盔形毕赤酵母（Pichia galeiformis）是夏黑A和刺葡萄B发酵前期的优势菌;在不同品种葡萄自然发酵中期均含有泽普林假丝酵母（Candida zemplinina）和盔形毕赤酵母;刺葡萄A、刺葡萄B和夏黑B发酵后期的优势菌为盔形毕赤酵母,所占比例分别为40.00%、55.56%和71.43%;酿酒酵母在夏黑A、玫瑰香和夏黑B发酵中期开始出现,直到发酵后期,均占有较大比例,分别为66.67%、42.86%和14.29%。初步葡萄酿酒发酵表明,酿酒酵母VMH-M042的酿酒性能（酒精度12.5%、总糖含量76.0 g/L、还原糖含量40.5 g/L、总酸含量5.6%）优良。【结论】福建地区不同品种葡萄分离得到的酵母菌资源丰富,区域性差异明显,特异性资源较多,其中酿酒酵母VMH-M042在葡萄酒发酵中表现出较优良的酿酒性能,可为南方葡萄酒酿制提供丰富的菌种资源和理论依据。
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粳稻云引稻瘟病抗性近等基因系与免疫应答相关的LRR-RLKs差异基因分析
《科学通报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：在广谱抗稻瘟病品种云引与普感稻瘟病品种丽江新团黑谷（Lijiangxintuanheigu, LTH）构建的近等基因系抗、感病子代基因组重测序的差异基因中,从与免疫应答（immune response）相关的分类单元里得到8个基因序列有差异的基因.它们都为编码富含亮氨酸重复序列的类受体蛋白激酶基因,并聚集于11号染色体的邻近位置,且与已知的白叶枯病抗性基因Xa21具有一定同源性.为进一步探究这些类受体蛋白激酶类基因在稻瘟病抗性中可能发挥的功能,我们分析了这些基因的结构、进化及抗感子代间的序列差异类型,同时还分别采用离体和喷雾接菌的方式对云引和LTH进行稻瘟病接种并取样.通过实时荧光定量PCR（quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR）发现,部分基因能受到稻瘟病菌的诱导,推测它们可能在水稻对抗稻瘟病病菌中发挥一定作用,为进一步挖掘稻瘟病相关抗性基因奠定基础.
关键词： 近等基因系 免疫应答 富含亮氨酸重复序列的类受体蛋白激酶 稻瘟病
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日本刀角瓢虫对不同叶毛密度茄子品种的产卵选择性
《昆虫学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】产卵是昆虫发育过程中繁衍后代、维持种群数量的重要环节。在前期研究发现日本刀角瓢虫Serangium japonicum喜欢在茄子Solanum melongena叶片上产卵的前提下,本研究旨在深入探究日本刀角瓢虫对不同叶毛密度茄子品种的产卵选择性,以期进一步明确植物叶毛介导的日本刀角瓢虫产卵选择机制。【方法】观察日本刀角瓢虫雌成虫在4个茄子品种（黑到底、黑妞、日友长直壮、络星）叶碟和植株上的产卵选择性,测定不同茄子品种上日本刀角瓢虫后代的生长发育及成虫的繁殖力、捕食能力和对叶片的附着力,观察4个茄子品种叶片背面超微结构,测定日本刀角瓢虫雌成虫对茄子叶片的气味选择,测量茄子叶片上烟粉虱Bemisia tabaci卵粒的长度和宽度,测定日本刀角瓢虫卵被其雌成虫的同类捕食风险。【结果】日本刀角瓢虫偏好在黑到底上产卵,后代个体在黑到底品种上总发育历期（15.41±0.21 d）最短,亲代单雌产卵量（877.44±15.27粒/头）最高。但是,日本刀角瓢虫的产卵量占比与子代生长表现（发育历期、存活率和成虫体重）和成虫生存表现（繁殖力和捕食能力）均无显著相关性,而与叶片背面叶毛密度和长度存在显著正相关性;日本刀角瓢虫在茄子叶碟上的产卵量占比与日本刀角瓢虫雌成虫附着力存在显著正相关性。日本刀角瓢虫雌成虫附着力与叶毛密度显著正相关,而与亲代生长表现无显著相关关系。茄子叶片气味、猎物质量以及被同类捕食风险均不显著影响日本刀角瓢虫的产卵选择。【结论】茄子叶片背面叶毛密度及叶毛介导的日本刀角瓢虫附着力在日本刀角瓢虫对茄子叶片的产卵选择性中起重要作用。
关键词： 日本刀角瓢虫 产卵选择 叶片 叶毛密度 选择性-生长表现假说 附着力
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草地贪夜蛾生物防治研究进展
《福建农业学报 》 2021 CSCD
摘要：草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda原产于美洲热带和亚热带地区,是一种破坏性极强的害虫,可对近180种农作物造成破坏,严重威胁着粮食安全。草地贪夜蛾的迁飞能力强,成虫一晚能飞100 km以上,迅速传播。其自2019年入侵我国,已在26个省发现入侵和为害,并呈继续北迁的趋势,对草地贪夜蛾的防控将是一项长期重大的任务。目前,国内外对草地贪夜蛾防治主要以化学农药为主,但易致使其产生抗药性和造成环境污染,因此开发有效、低风险的防控方法以实现对草地贪夜蛾的可持续治理成为研究热点。生物防治是一种可有效替代化学防治的经济、环保的防控措施,主要是利用天敌昆虫（寄生性和捕食性昆虫）、病原微生物（如细菌、线虫、病原真菌、病毒）、植物源农药及性信息素等对害虫进行科学防治。本文总结了国内外关于草地贪夜蛾生物防治的研究进展概况,以期为今后科学防治草地贪夜蛾提供参考。
关键词： 草地贪夜蛾 生物防治 天敌昆虫 病原微生物 植物源农药 性信息素
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枯草芽孢杆菌CS27的5 L发酵罐培养条件及保藏载体筛选
《扬州大学学报(农业与生命科学版) 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） CS27是一株饲用微生物添加剂菌株。为提高5 L发酵罐枯草芽孢杆菌CS27的生物量,采用单因素试验方法优化发酵工艺条件,最终确定最佳工艺参数为搅拌速度180 r·min-1、pH值6.5、溶氧量10%、温度32℃、最适培养时间21 h,在此发酵条件下枯草芽孢杆菌CS27菌体生物量可达1.45×1010 cfu·mL-1,并筛选出吸附效果较好的沸石作为保藏载体,为枯草芽孢杆菌CS27工厂化应用及保藏提供理论基础。
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9种种衣剂对鲜食玉米草地贪夜蛾、顶(茎)腐病的防效及其安全性评价
《福建农业学报 》 2021 CSCD
摘要：【目的】明确不同种衣剂对鲜食玉米主要病虫害的防效及其对玉米的安全性,为福建省玉米生产筛选合适的种衣剂。【方法】选用5种杀虫剂类型种衣剂和4种杀虫剂/杀菌剂组合物类型种衣剂,在田间条件下研究供试种衣剂对玉米出苗率、保苗率、苗期草地贪夜蛾及乳熟期顶（茎）腐病、玉米产量的影响。【结果】除35.00%丁硫克百威种子处理粉剂（好年冬）之外,其他8种种衣剂对玉米种子出苗率、田间保苗率无不良影响。种衣剂50.00%氯虫苯甲酰胺种子处理悬浮剂（路明卫）5 g·kg-1和IPP1 25 g·kg-1拌种处理对玉米苗期草地贪夜蛾防治效果显著,防效分别为64.15%和59.40%;50.00%氯虫苯甲酰胺种子处理悬浮剂/4.23%种菌唑·甲霜灵微乳剂（顶苗新）5 g·kg-1+5 g·kg-1拌种处理对顶（茎）腐病的发生有较好防治效果,病株率防效达56.07%。从玉米产量来看,50.00%氯虫苯甲酰胺种子处理悬浮剂/35 g·L-1精甲霜灵·咯菌腈悬浮种衣剂（满适金）5 g·kg-1+2 g·kg-1、50.00%氯虫苯甲酰胺种子处理悬浮剂/快苗5 g·kg-1+2 g·kg-1、50.00%氯虫苯甲酰胺种子处理悬浮剂/4.23%种菌唑·甲霜灵微乳剂5 g·kg-1+5 g·kg-1处理种子能促进玉米增产,其籽粒增产率分别为5.92%、 2.05%和6.24%,鲜穗增产率分别为3.17%、5.58%和3.55%。【结论】50.00%氯虫苯甲酰胺种子处理悬浮剂/4.23%种菌唑·甲霜灵微乳剂可作为福建地区鲜食玉米生产合适的种衣剂,不仅对玉米生长安全,病虫防效显著,而且能增加玉米产量。
关键词： 鲜食玉米 种衣剂 草地贪夜蛾 顶腐病 茎腐病 安全性
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响应面法优化余甘子种质资源ISSR反应体系
《福建农业学报 》 2021 CSCD
摘要：【目的】优化余甘子种质资源ISSR-PCR反应体系,为余甘子种质资源遗传多样性及亲缘关系研究提供基础。【方法】以缅甸、印度、广东、云南、福建等5份来源不同的余甘子种质资源的基因组DNA组成混合的DNA模板,综合单因素试验和响应面分析法,分析引物浓度、2×Taq Master Mix添加量、DNA模板量、退火温度等反应条件对ISSR-PCR反应体系的影响,优化建立余甘子ISSR-PCR反应体系。【结果】引物浓度和2×Taq Master Mix添加量对扩增效果有较大影响,DNA模板量影响较小;引物浓度和DNA模板量交互作用明显;余甘子ISSR反应体系为引物浓度0.4μmol·L-1,2×Taq Master Mix添加量13μL,DNA模板量30 ng,扩增结果与响应面分析模型理论值相对误差仅为9.39%;退火温度为50.5～52.7℃时,随着温度的升高,条带质量变好,数量变多,退火温度为52.7℃时可获得多样性好的清晰条带。【结论】获得ISSR-PCR反应体系为引物浓度0.4μmol·L-1,2×Taq Master Mix添加量13μL,DNA模板量30 ng,退火温度52.7℃,扩增循环数35循环,扩增获得的条带清晰、稳定,多样性好,该体系适于余甘子种质资源的遗传多样性和亲缘关系等分析研究。
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花生壳生物炭用量对猪粪堆肥温室气体和NH3排放的影响
《中国农业大学学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为研究不同花生壳生物炭添加比例对猪粪堆肥过程中温室气体和NH3排放的影响。利用强制通风静态堆肥技术,研究0（对照）、3%、6%和9%花生壳生物炭添加比例（质量比）对猪粪堆肥过程CO2、CH4、N2O和NH3排放和堆肥性质的影响。结果表明:添加生物炭能够延长堆肥高温期持续天数,使pH提高0.09～0.13个单位,EC提高11.7%～50.6%;各堆肥处理CO2、CH4和N2O排放速率均随发酵时间的延长呈先升高后降低的趋势,且CO2、CH4和N2O排放速率均与pH具有显著的相关性;随生物炭用量的增加,猪粪堆肥过程中CO2排放速率表现为先升高后降低的变化趋势,其中以3%生物炭添加比例处理最高,其平均CO2排放速率比对照增加12.9%;N2O排放和NH3挥发均以9%生物炭添加比例处理最低,分别比对照降低12.5%和29.9%。综上,在整个堆肥过程中,花生壳生物炭的添加降低了N2O和CH4的累积排放量,且随花生壳生物炭添加比例的增加,温室气体减排效应增大。
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PRV FB株gE/gI基因缺失株的构建及其灭活疫苗免疫保护效力评价
《中国预防兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：自2011年以来,新型伪狂犬病病毒（PRV）变异株在我国免疫猪场不断出现,导致目前商品化疫苗免疫效果不佳。为研究PRV FB株gE/gI基因缺失株疫苗防控新型PRV变异株感染的效果,本研究以PRV自然弱毒FB株作为亲本株,通过同源重组的方法构建了PRV g E/gI基因缺失株,将不同代次PRV FBΔgE/gI株与亲本PRV FB株分别接种BHK-21细胞,观察CPE和测定TCID50效价,分析缺失株的遗传稳定性,结果显示FBΔgE/gI株感染BHK-21细胞后产生与亲本株FB相似的CPE,且不同代FBΔgE/gI株的TCID50与亲本株相比均无明显变化。将FB株、FBΔgE/gI株、Bartha-K61株分别接种健康新西兰兔,比较三者的安全性,结果显示,接种BarthaK61株的家兔全部死亡（5/5）,接种FB株的家兔死亡2只（2/5）,而接种FBΔgE/gI株的家兔全部（5/5）健活,表明FBΔgE/gI株对新西兰兔的致病力较低,安全性更高。将FBΔgE/gI株分别与水相佐剂GEL02和两性佐剂ISA 206制成灭活疫苗免疫绵羊28 d后,采用ELISA法检测各组绵羊的gB和gE抗体,并且以PRV变异株FJ-2012攻毒,评估FBΔgE/gI株灭活疫苗对绵羊的保护效力,结果显示,接种GEL02和ISA 206为佐剂的FBΔgE/gI灭活疫苗绵羊在免疫后28 d,抗体均全部转阳;对照组绵羊在攻毒后6 d内全部死亡（5/5）,以GEL02作为佐剂的灭活疫苗组绵羊死亡2只（2/5）,而以ISA 206为佐剂的绵羊全部存活（5/5）,保护率达到100%,表明以ISA 206作为佐剂的FBΔgE/gI株灭活疫苗能够完全保护绵羊抵御PRV变异株的攻击。本研究首次基于PRV自然弱毒FB株构建的FBΔgE/gI株,与Bartha-K61株相比具有更高的安全性,与佐剂ISA 206制成灭活疫苗免疫绵羊后能够完全抵抗新发变异PRV的攻击,具有完全保护作用。本研究为我国新发变异PRV疫苗的研发提供了新的参考依据。
关键词： 伪狂犬病毒 gE/gI基因缺失 有效性 安全性 灭活疫苗
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