基于天蚕素D的新型抗病毒多肽对猪繁殖呼吸综合征病毒的抑制作用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 臧浩月

作者： 臧浩月;彭婕;郭慧琛;孙世琪;曾巧英;周静静

作者机构：

关键词： 抗菌肽;抗病毒活性;阳离子氨基酸;疏水性氨基酸;猪繁殖呼吸综合征病毒

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2025 年 41 卷 007 期

页码： 2735-2747

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 由猪繁殖呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引发的猪繁殖呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是目前危害养猪业的主要疾病之一.本研究旨在设计优化天然抗菌肽,筛选具有显著抑制PRRSV活性的抗病毒多肽,为PRRS防控制剂的研发提供新思路.以天蚕素D(cecropin D,CD)为母肽,通过氨基酸替换策略设计了 CD-2、CD-3、CD-4这3个衍生物,利用固相合成技术合成CD及其衍生物,并使用质谱(mass spectrometry,MS)和反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)进行多肽的序列鉴定、纯化和纯度分析.通过圆二色谱研究多肽二级结构,使用CellTiter 96? AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒测定多肽细胞毒性.通过蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)以及间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)研究多肽对 PRRSV 的抗病毒活性及作用阶段.MS以及RP-HPLC结果表明,CD及其衍生物被成功合成,且纯度高达95%.圆二色谱分析结果显示,CD衍生物在细胞膜模拟环境中表现出更稳定且丰富的α螺旋结构.细胞毒性测定结果表明,所有被测多肽在100 ng/mL的工作浓度下的细胞毒性可忽略.多肽抗PRRSV的作用阶段试验结果显示,衍生多肽在病毒侵入阶段的抗病毒活性较母肽显著增强,说明通过引入赖氨酸、色氨酸和苯丙氨酸,增强了母肽的阳离子性和疏水性,进而增强了衍生多肽在侵入阶段的抗PRRSV活性.本研究结果为抗病毒多肽的应用及结构优化提供了理论基础,并为PRRSV的防控提供了新的思路.

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