犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙伟伟

作者： 孙伟伟;钱晶;王晶宇;欧阳伟;夏兴霞;王晓丽;诸玉梅;马孙婷;王永山;徐业芬

作者机构：

关键词： 犬瘟热病毒;H蛋白;单克隆抗体;抗病毒活性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2019 年 011 期

页码： 1383-1389

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备犬瘟热病毒(CDV)H蛋白单克隆抗体,采用蔗糖密度梯度离心法提纯CDV-Ondetstepoort株,利用RT-PCR方法扩增其H基因截短片段(H1、H2、H3),克隆至pET-28a (+)载体并转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化3种截短H蛋白;以纯化病毒为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA、间接免疫荧光法(IFA)和病毒中和试验分析杂交瘤细胞的生物学特性.结果表明,纯化的截短H蛋白表达正确,以此筛选到7株能稳定分泌犬瘟热病毒和重组H2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3B1、3B5、3C5、3D5、5A6、4G12和7B2),抗体亚类鉴定均为Ig G1κ;IFA检测均为阳性,表明7种单克隆抗体特异性好;病毒中和试验测定其培养上清的抗体中和效价为24~28,诱生BALB/c小鼠腹水的抗体中和效价为1*102~1*106;间接ELISA叠加试验显示,3B5、4G12、5A6、7B2之间的叠加系数均在50%以上,表明这4种单克隆抗体识别不同抗原表位;另外,3B5、4G12、5A6、7B2还能中和当前流行的Asia 1型CDV毒株,具有较好的广谱中和活性.本研究为后续CDV感染的免疫治疗和CDV检测方法的建立提供了材料基础.

分类号： S852.65

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