牛Asia 1型口蹄疫病毒感染性克隆的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李爽

作者： 李爽;张润祥;宋鸽;高明春;刘湘涛;王君伟

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;全长cDNA;感染性克隆;反向遗传;病毒拯救;体外转录

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2009 年 25 卷 11 期

页码： 1621-1626

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究在完成Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)As01株全基因组测序的基础上,采用融合PCR扩增得到含有15个C碱基的5′端片段(约1800bp),并利用长片段PCR扩增得到基因组3′端片段(约6700bp)。再利用单一的酶切位点将2个片段克隆到pBluescript SK载体中,从而获得携带As01株基因组全长cDNA的重组质粒pBSAs。将该质粒线性化后作为模板体外转录并转染BHK-21细胞,可观察到典型的细胞病变。对收获的病毒采用RT-PCR、间接免疫荧光和电镜观察等检测及鉴定,结果表明,拯救出了具有感染性的Asia1型FMDV。拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(LD50)差异不显著,具有相似的生物学特征。该感染性克隆的构建,为深入研究FMDV的致病机理及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。

分类号： S852.65

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