大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周勇

作者： 周勇;曾令兵;孟彦;周群兰;张辉;高正勇;肖艺;孙建滨

作者机构：

关键词： 大鲵;虹彩病毒;主要衣壳蛋白;TaqMan实时荧光定量PCR

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2012 年 36 卷 05 期

页码： 135-141

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus,GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp的片段,克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-MCP。经PCR鉴定确认正确后,以10倍梯度稀释pMD19-T-MCP重组质粒,作为标准模板进行TaqMan实时荧光定量PCR扩增,制作标准曲线,建立了大鲵虹彩病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.990 19。组内重复试验的CT值标准偏差为0.52%。检测结果显示,该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性,与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应,特异性好,检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数,约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸,较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍。研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。

分类号： S947.3

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