对虾组织样品中RNA的铵盐常温保存法及其效果

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杜迎彬

作者： 杜迎彬;王志杰;杨冰;张晓华;黄倢

作者机构：

关键词： 饱和铵盐溶液;样品保存;水生动物;RNA

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 1000-7075

年卷期： 2013 年 34 卷 03 期

页码： 88-96

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究以凡纳滨对虾为研究对象,取其肌肉组织28℃下保存于不同饱和度和不同pH的铵盐保存液中,保存一定时间后,通过组织总RNA提取、RT-PCR法及荧光定量RT-PCR法鉴定比较选择方便有效的保存方法。结果显示,从含25mmol/L柠檬酸钠和20mmol/LEDTA的饱和醋酸铵保存液和饱和硫酸铵保存液中保存的组织中提取的RNA较完整。通过调节pH进行保存液的优化,提取RNA后的凝胶电泳、RT-PCR及荧光定量RT-PCR确定的基因拷贝数显示,从含25mmol/L柠檬酸钠和20mmol/LEDTA的饱和醋酸铵保存液(pH6.0)和饱和硫酸铵保存液(pH5.2)保存的组织中能成功地提取出大量的RNA,且RNA分子完整;通过荧光定量RT-PCR法显示新鲜组织的18SrRNA拷贝数为107Copies/mg组织,保存28d后的组织18SrRNA拷贝数可达到105Copies/mg组织,而空白对照组的18SrRNA拷贝数只有103Copies/mg组织。说明保存液对于抑制核酸降解有较好的效果。这种简便有效的保存液为样品的保存、现场采集标本及后续的分子实验奠定了基础。

分类号： S917.4

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