甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因(SofSPSA)的克隆及正反义植物表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄东亮

作者： 方锋学;黎涛;李双喜;廖青;李杨瑞

作者机构：

关键词： 甘蔗;蔗糖磷酸合成酶;植物表达载体

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2011 年 19 卷 04 期

页码： 42-51

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 蔗糖磷酸合成酶(SPS)是植物体内控制蔗糖合成的关键酶。本研究通过搜索NCBI数据库获得迄今植物中所有的蔗糖磷酸合成酶基因序列共77条,其中全长序列43条;对全长序列进行进化分析表明,植物SPS基因分为A、B、C和D四个家族,同一植物体内有多个分别属于不同家族的SPS基因;比对A家族中进化关系很近的甘蔗(Saccharum officinarum)SofSPSII、水稻(Oryza sativa)OsSPS4、黑麦草(Lolium perenne)LpSPS和竹子(Bambusa oldhamii)BoSPS基因序列,并在保守区设计一对引物扩增获得甘蔗A家族SPS基因(SofSPSA)2553bp序列,结合5'-RACE和3'-RACE技术获得甘蔗SofSPSA基因全长cDNA序列3906bp;该序列包含一个3183bp的开放阅读框(ORF),编码1060个氨基酸残基的蛋白,其理论分子量和等电点分别为118.4kD和6.09。该序列的起始密码子(ATG)位于转录起始位点后359bp处,终止密码子(TAA)后还有一段365bp的非编码序列,并带有真核生物典型的polyA尾巴(GenBank登录号:HM854011);SofSPSA与SofSPSII、OsSPS4、LpSPS、BoSPS的氨基酸相似性分别为99.3%、91.8%、91.6%和91.9%,一致性分别为99.2%、87.9%、87.5%和87.8%;设计引物分别扩增正、反向SofSPSA基因ORF并分别连到pBI121上获得由组成型表达启动子35S驱动的正、反义植物表达载体pBI-SofSPSA和pBI-anti-SofSPSA,为进一步研究甘蔗SPS基因的生物学功能及利用甘蔗SPS基因改良作物品种提供科学依据。

分类号： S566.1

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