鲤鱼外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28全长cDNA的克隆与差异表达分析

文献类型: 中文期刊

第一作者: 李莲瑞

作者: 李莲瑞;卢强;付宝权;谭业平;邓洪宽;崔国祯;夏慧卿;刘明远;韩文瑜

作者机构:

关键词: 鲤鱼;PA28;cDNA克隆;表达鉴定

期刊名称: 中国兽医学报

ISSN: 1005-4545

年卷期: 2006 年 26 卷 05 期

页码: 544-547

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 对DD-RTPCR获得的差异显示片段C15进行地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆DM7。测序分析表明,该阳性克隆长1 097 bp,具有完整的开放阅读框架,为编码鲤鱼蛋白酶体激活因子PA28的全长cDNA,编码249个氨基酸,含有PA28的α和β亚单位功能结构域,与已报道的斑马鱼的蛋白酶体激活因子PA28的同源性达93%。分离鲤鱼外周血白细胞,经有丝分裂原在不同条件下刺激后,利用Trizol提取总RNA,根据得到的PA28全长cDNA序列和鲤鱼β-actin的序列,设计引物,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定白细胞中PA28基因mRNA表达量的变化。结果表明,白细胞经LPS、ConA刺激后,PA28基因的mRNA表达量有所增加,但并不随时间的延长而持续增加。

分类号: Q78

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