油菜不同器官高质量总蛋白提取方法和双向电泳体系的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘海衡

作者： 刘海衡;胡胜武;刘胜毅;黄军艳;董彩华

作者机构：

关键词： 甘蓝型油菜;花药;花蕾;叶片;总蛋白提取;双向电泳

期刊名称： 中国油料作物学报

ISSN： 1007-9084

年卷期： 2009 年 31 卷 04 期

页码： 426-433

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以显性核不育油菜Shaan-GMS不育株和可育株的花序和叶片为材料,采用TCA(三氯醋酸)-丙酮法提取油菜花蕾、花药及叶片总蛋白,对总蛋白提取方法、IPG(固定pH梯度)胶条种类、聚焦程序、凝胶浓度、上样量等环节进行了优化。结果表明,采用理想的蛋白质裂解液(7mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS(3-[3-(胆酰氨丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐),65mmol二硫苏糖醇,0.5%IPG缓冲液pH3~10或pH4~7,全蛋白酶抑制片剂(片/10mL))裂解蛋白,以150μg上样,按IEF程序Ⅱ(30V,12h;200V,1h;500V,1h;1 000V,0.5h;10 000V,2h;10 000V,8h)进行等电聚焦,10%SDS-PAGE胶浓度进行第二向电泳,银染方法检测,可得到背景清晰、分辨率较高的油菜花蕾、花药及叶片蛋白质电泳图谱。高质量油菜蛋白的提取方法和蛋白质分离双向电泳体系的优化可为油菜蛋白质组学研究奠定技术基础。

分类号： S565.403

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