小反刍兽疫N5蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘斌

作者： 刘斌;陈晓宇;牟筱;黄银君;牟克斌;祁光宇;许涛;胡永浩

作者机构：

关键词： 小反刍兽疫;N5基因;间接酶联免疫吸附试验

期刊名称： 甘肃农业大学学报

ISSN： 1003-4315

年卷期： 2017 年 52 卷 02 期

页码： 1-6

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立一种适用于PPRVN蛋白抗体的间接ELISA检测方法,应用于PPR防疫.【方法】根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,设计1对特异引物对N5基因扩增,经测序分析后将N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,成功构建pET-32a-N5质粒.将pET-32a-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,重组蛋白分析具有良好的反应原性.【结果】利用原核表达纯化的PPRV N重组蛋白作为包被抗原,初步建立了一种能够检测针对PPRV N蛋白抗体的间接ELISA方法.用建立的方法对112山羊份血清进行了抗体检测,该方法与竞争ELISA试剂盒对比,临床符合率94.8%.【结论】该方法具有较好的敏感性、重复性和特异性.

分类号： Q786

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