H3N2亚型猪流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘天强

作者： 刘天强;于海;张强;李国新;王斌;童光志

作者机构：

关键词： H3N2亚型猪流感病毒;血凝素基因;原核表达

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2008 年 30 卷 10 期

页码： 795-799+823

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR扩增H3N2亚型猪流感病毒HA1基因。将该片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中,构建原核表达载体pET-HA1。阳性质粒转化宿主菌BL21,经IPTG诱导,HA1基因获得表达,其重组蛋白以包涵体的形式存在。通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定表达HA1基因的最佳诱导条件。Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原活性。用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测H3亚型猪流感病毒抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为4μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,阳性标准初步判定为:待检血清OD值>0.4,而且待检血清OD值/阴性血清OD值>2。应用此方法对309份临床血清样品进行了检测,并与HI方法进行了比较,结果表明基于重组HA蛋白的间接ELISA方法可用于H3N2亚型猪流感病毒感染的初步诊断。

分类号： S854.43

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