FABP4转基因牛的分子生物学鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵敬贤

作者： 赵敬贤;李娟;严兴荣;倪和民;陈燕;张路培;高会江;许尚忠;李俊雅;高雪

作者机构：

关键词： 牛;转基因;FABP4基因;肌内脂肪;生物学鉴定

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2014 年 47 卷 24 期

页码： 4895-4903

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]对前期获得的3头转基因牛进行分子生物学评价,包括转基因阳性鉴定、基因及蛋白表达水平的检测,旨在进一步为转基因牛的安全评价提供一些科学依据。[方法]根据Gen Bank上公布的牛FABP4基因(Gen Bank登录号:NM_174314)m RNA序列,利用兼并密码子对现有FABP4基因进行突变,并构建了p EGFP-C1-FABP4真核表达载体、通过细胞转染、体细胞核移植、胚胎移植技术获得3头转基因牛;分别采集了1号转基因牛不同组织样,2、3号转基因牛与野生型个体8、10、12、14月龄的血液样本,利用RT-PCR技术对所获转基因个体的阳性与否进行了鉴定;同时利用荧光定量PCR技术检测了1号转基因牛不同组织中外源性FABP4基因的表达情况,并分析了2、3号转基因牛在8—14月龄之间,外源性FABP4基因、内源性FABP4基因的变化趋势,并通过叠加转基因牛外源与内源性FABP4基因的表达量,分析了转基因牛和非转基因牛FABP4基因的整体表达水平差异;通过Western blotting技术分析了3头转基因牛外源性FABP4基因的蛋白表达水平。[结果]1对所获得的3头转基因牛RT-PCR检测发现,3头转基因个体各样本均在205 bp处产生条带,而妊娠母牛及阴性对照在205 bp处均未有条带出现,初步表明3头转基因牛均为转基因阳性。2实时定量PCR检测表明,1号转基因牛的外源性FABP4基因在多数组织均有较高表达,其中脂肪组织表达量最高、肾脏和背最长肌次之,肺部的相对表达量极低。3号转基因牛外源性FABP4基因的表达水平高于2号转基因牛,且2、3号转基因牛外源性FABP4基因的表达水平随月龄变化均呈现先上升后下降趋势;在内源性FABP4基因表达水平检测中发现,外源性FABP4基因的转入抑制了转基因牛体内内源性FABP4基因的表达,且随月龄变化转基因牛体内内源性FABP4基因表达水平均呈现上升趋势;野生型牛内源性FABP4基因的表达水平随着月龄变化逐步下降,而转基因牛体内内源性FABP4基因的表达量均低于野生型牛;通过对2、3号转基因牛外源与内源性FABP4基因相对表达量的叠加分析发现,转基因牛FABP4基因整体表达量较野生型大幅升高。3蛋白表达检测结果与m RNA检测结果基本一致,外源性FABP4基因在1号转基因牛除肺部外的各个组织均检测到外源FABP4基因的蛋白表达,其中背最长肌表达量最高;3号转基因牛蛋白表达水平高于2号转基因牛。[结论]获得的3头牛均为FABP4阳性转基因牛,且外源性FABP4基因在体内能够正常表达,转基因牛FABP4表达量较野生型大幅升高,同时外源性FABP4基因的转入抑制了内源性FABP4基因的表达。

分类号： S823

  • 相关文献

[1]体细胞核移植生产转基因牛胚胎的研究. 邓守龙,刘晓,曹文广,王安江. 2008

[2]转基因牛研究进展. 崔文涛. 2007

[3]牛输卵管上皮细胞转人胶原蛋白cDNA基因及转基因克隆胚胎. 吕自力,王亮,刘婷婷,石国庆. 2012

[4]家畜胚胎克隆关键技术及应用研究. 宋雪莹,佟桂芝,宋斌,李平,刘德会,李玉龙,丁丽艳,李同豹. 2020

[5]转GFP基因核移植牛胚胎的研究. 邓守龙,吕自力,王亮,王安江,曹文广. 2009

[6]牛卵丘细胞的生长特征与转基因. 吕自力,王亮,石国庆. 2011

[7]以不同类型的转基因细胞为核供体生产牛的转基因克隆胚胎. 龚国春,戴蕴平,樊宝良,朱化彬,王海平,王莉莉,方昌阁,万荣,刘颖,李荣,李宁. 2003

[8]牛FABP3转基因小鼠的遗传及表达特性研究. 李娟,杜新华,陈燕,高雪,李俊雅,许尚忠. 2015

[9]利用体细胞核移植技术生产转基因牛. 龚国春,戴蕴平,樊宝良,朱化彬,王莉莉,王海平,汤波,刘颖,李荣,万荣,黄银花,李宁. 2003

[10]慢病毒介导稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系的构建. 滑留帅,王璟,白杰,朱肖亭,陈付英,于翔,楚秋霞,辛晓玲,徐照学,赵洪昌,王二耀. 2018

[11]不同发育阶段草原红牛背最长肌FABP4基因表达水平研究. 秦立红,刘伟英,曹阳,张国良,赵玉民. 2011

[12]黄瓜耐低温基因转化后代的生物学鉴定. 卢淑雯,刘文萍,李柱刚,南相日,刘建新,秦智伟. 2010

[13]新疆地区牛种布鲁菌流行株的分子分型鉴定. 叶锋,马晓菁,刘丽娅,谢彩云,谷文喜,钟旗,马俊杰,易新萍. 2019

[14]砂梨上苹果茎痘病毒的调查分析及RT-PCR与TC-RT-PCR检测研究. 侯雨萱,洪霓,邓晓云,胡红菊,王国平. 2005

[15]小白菜根际高效解磷菌的分离鉴定与培养条件优化. 瞿云杰,唐易,李花,家佳丽,贾幸宸,荣航,熊月明,王明元. 2024

[16]羔羊下痢病病样中牛病毒性腹泻病毒的分离及其生物学鉴定. 张国芳,任向远,扎纳,张恒顺,卢岩,糜克永,丁清泉,董长坦,王蔷,张雁滨. 2010

[17]不同杂交组合肉牛肌内脂肪含量与部分肉质性状的相关分析. 曲桂娟,孟轲音,于丹,祁宏伟,董晓庆,秦贵信. 2013

[18]松辽黑猪肌内脂肪含量与背膘厚的关联分析. 徐炜琳,李娜,李兆华,刘庆雨,张琪,金鑫,张树敏. 2017

[19]莱芜猪和杜洛克猪肌肉H-FABP基因表达量与肌内脂肪和脂肪酸含量关联分析. 呼红梅,王继英,郭建凤,张印,沈彦锋,武英. 2010

[20]过瘤胃保护性精氨酸和大豆油对细毛羊肌内脂肪和脂肪酸组成的影响. 李金霞,孙海洲,赵存发,桑丹,张春华,凌树礼,珊丹,任晓萍. 2012

作者其他论文 更多>>

微信小程序