抗苏云金芽孢杆菌Cry1B毒蛋白质单链抗体的筛选与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐重新

作者： 徐重新;张霄;刘媛;王耘;张存政;刘贤进

作者机构：

关键词： 噬菌体抗体库;Cry1B毒蛋白质;单链抗体;ELISA

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 04 期

页码： 202-206

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用人源化噬菌体抗体库筛选抗Bt Cry1B毒蛋白质的单链抗体(Single-chain antibodies,scFv)。将扩增后的噬菌体抗体库与固相化包被的Cry1B毒蛋白质特异性结合,经4轮"吸附-洗脱-扩增"后,富集特异性识别Cry1B毒蛋白质的噬菌体单链抗体。从最后一轮筛选中随机挑取单菌落进行单克隆ELISA鉴定,对阳性克隆进行PCR扩增、DNA电泳鉴定及测序,成功筛选获得8个阳性噬菌体scFvs,经鉴定均有完整外源基因片段插入。挑取阳性值最高的scFv(1E2)建立了基于单链抗体的Cry1B毒蛋白质间接竞争ELISA检测方法。结果表明,Cry1B毒蛋白质对噬菌体scFv(1E2)的抑制中浓度(IC50)为1.075μg/ml,最低检测限(IC10)为0.013 4μg/ml,线性检测范围在0.5μg/ml至4.0μg/ml之间。

分类号： S476

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