猪骨髓源巨噬细胞的分离和培养

文献类型： 中文期刊

第一作者： 江珊

作者： 江珊;虞凌雪;于海;姜一峰;李国新;刘长龙;周艳君;高飞;赵款;张玉娇;曹云雷;白渊哲;童光志

作者机构： 中国农业科学院上海兽医研究所

关键词： 骨髓源巨噬细胞;分离;培养

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年 30 卷 004 期

页码： 93-98

收录情况： 北大核心

摘要： 为深入研究猪骨髓源巨噬细胞的生物学功能,本研究建立了有效的猪骨髓源巨噬细胞分离、培养的方法.从15日龄健康仔猪体内无菌取出股骨和胫骨,用含10%灭活FBS的RPMI 1640培养基冲洗并收集骨髓细胞悬液,再将红细胞裂解以获取猪骨髓干细胞(BMHC).BMHC在含M-CSF 100 ng/mL的RPMI 1640培养液的诱导条件下进行体外贴壁培养,6~7 d时获得纯度较高的M0型骨髓源巨噬细胞(BMDM),再辅以LPS和IFN-γ共刺激,以及IL-4刺激M0型骨髓源巨噬细胞分别向M1型和M2型分化.采用倒置显微镜观察显示,与未刺激分化的巨噬细胞相比,分化后巨噬细胞更大,状态更平整且颗粒状更明显,相较于M1型,M2型巨噬细胞形成更多伪足及小触角.通过流式细胞术研究巨噬细胞生物学功能显示,活化后的M0型、M1型和M2型巨噬细胞亚群都具有吞噬作用,并且活化后的巨噬细胞都能检测到细胞内活性氧(ROS)的变化.由以上实验结果显示,本研究建立了体外骨髓源巨噬细胞的培养方法,并成功进行了M0型骨髓源巨噬细胞向M1、M2亚群的体外分化.

分类号： S852.4

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