紫云英ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙清信

作者： 孙清信;陈坚;张辉;祁建民;林忠平;胡鸢雷;林新坚

作者机构：

关键词： 紫云英;退火温度;ISSR引物;正交试验;体系优化

期刊名称： 植物遗传资源学报

ISSN： 1672-1810

年卷期： 2012 年 13 卷 05 期

页码： 870-878

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以紫云英为研究材料,用哥伦比亚大学(UBC)公布的100条ISSR引物和11种株系紫云英品种的DNA为模板进行PCR扩增,筛选出33条扩增条带较好的ISSR引物,对其中的ISSR引物进行梯度PCR,筛选出最佳的退火温度。再采用正交试验和单因素试验相结合的方法对紫云英ISSR-PCR反应体系的5种因素(模板、Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTP及引物)进行优化浓度。确立了适合紫云英的ISSR分析的反应体系。在25μl反应体系中,其反应浓度为:DNA模版50.00ng,Mg2+2.00mol/L,Taq聚合酶1.0 U,dNTP 0.25mmol/L,引物0.20μmol/L,2.5μl 10×buffer。本试验为以后利用ISSR技术进行紫云英遗传多样性分析和物种保护奠定了技术基础。

分类号： S551.9

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