猪IL-1β与IL-18 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立
文献类型: 中文期刊
第一作者: 汪伟
作者: 汪伟;倪艳秀;温立斌;吕立新;周俊明;俞正玉;茅爱华;张雪寒;李彬;郭容利;王小敏;范红结;何孔旺
作者机构:
关键词: 猪;促炎症细胞因子;IL-1β;IL-18;荧光定量PCR
期刊名称: 江苏农业学报
ISSN: 1000-4440
年卷期: 2011 年 27 卷 06 期
页码: 289-294
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用。为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PCR从3D4猪肺泡巨噬细胞系中克隆和扩增了上述3个因子核苷酸片段,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性模板,建立了检测IL-1β、IL-18及β-actin SYBR GREEⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.990以上;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;敏感性高,初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝;重复性好,组内变异系数均小于4%。
分类号: S854.43
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