基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李宁

作者： 李宁;孟春春;梁瑞英;李传峰;陈宗艳;缪秋红;毕庄莉;朱英奇;郭慧敏;刘光清;王桂军

作者机构：

关键词： 兔出血症病毒;VP60;优势抗原区;间接ELISA

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2014 年 03 期

页码： 1-7

摘要： 为建立一种检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A(31~250 aa)和B(470~579 aa)两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a(+),转染BL21感受态细胞,进行原核表达。用Western blot方法对表达产物(AB)的免疫原性进行鉴定,再以纯化的AB为诊断抗原,通过对抗原-抗体反应条件的多重优化,建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明,本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区(AB),重组蛋白的分子量约为36 kDa,该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原,成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用,证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。

分类号： S852.659.1

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