肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建

文献类型: 中文期刊

第一作者: 张雪寒

作者: 张雪寒;何孔旺;赵攀登;栾晓婷;叶青;温立斌;倪艳秀;李彬;郭容利;王小敏;周俊明;俞正玉;茅爱华;吕立新

作者机构:

关键词: 肠出血性大肠杆菌O157∶H7;toxB基因;缺失株;小鼠;黏附

期刊名称: 江苏农业学报

ISSN: 1000-4440

年卷期: 2012 年 28 卷 02 期

页码: 337-343

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。

分类号: S852.61

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