非洲猪瘟病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李海

作者： 李海;宋煜;吴汉;李桂珍;陈纯;李海涛;邵敏;王晓虎;扈荣良;周鹤峰

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;单克隆抗体;竞争ELISA;p30;p72;MGF360

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 802-810

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）p30、p72和MGF360-12L重组蛋白及其酶标单克隆抗体（Monoclonal antibodies, mAbs），建立一种快速、准确检测ASFV抗体的竞争ELISA法。分别利用纯化的ASFV p30、p72和MGF360-12L重组蛋白免疫BALB/c小鼠，通过聚乙二醇（PEG）诱导融合获得阳性杂交瘤细胞，腹水经辛酸-硫酸铵法纯化得到相应的mAbs，并使用HRP标记，建立竞争ELISA法并优化反应条件，对该法的临界值、敏感性、特异性和符合率进行评估。制备的p30、p72和MGF360-12L重组蛋白纯度良好，融合后的细胞株经Western blot鉴定具有良好的反应性和特异性，筛选的杂交瘤细胞株均为IgG类抗体，纯化后的mAbs符合抗体IgG分子量大小，经HRP标记后活性较高。竞争ELISA优化结果显示，血清与酶标mAbs最佳稀释倍数分别为1∶8和1∶3 200，临界值判定PI≤14.71%为阴性，PI≥18.97%为阳性，在14.71%≤PI≤18.97%期间为可疑，试剂盒敏感性为1∶128，经检测临床样品表明符合率极高。成功建立了ASFV抗体的快速检测方法，为ASFV的预防和大规模血清样品检测提供有效监测工具，并为ASFV疫苗免疫效果评估提供有效技术手段。

分类号： S858.28

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