醛糖还原酶AKR1B1调控甲型流感病毒复制机制的初步研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王一晗

作者： 王一晗;王波;王雨琴;李奇兵;王一涵;李梦雅;姜丽;陈化兰;李呈军

作者机构：

关键词： 流感病毒;醛糖还原酶;AKR1B1;流感病毒聚合酶

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 008 期

页码： 775-782

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 醛糖还原酶AKR1B1属于醛酮还原酶家族，是一种NADPH依赖性酶，可催化还原亲水性和疏水性醛。本实验室前期实验发现AKR1B1可以抑制流感病毒复制。为了探究醛糖还原酶AKR1B1调控流感病毒复制的具体机制，本研究通过siRNA干扰下调A549细胞中AKR1B1基因的表达后，经荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测细胞内AKR1B1 m RNA的转录水平；通过western blot检测siRNA干扰后细胞内AKR1B1蛋白的表达水平；采用噬斑滴定法检测过表达及干扰AKR1B1后对流感病毒滴度的影响；通过western blot检测干扰AKR1B1表达后对细胞内病毒蛋白表达量的影响及甲型流感病毒A/WSN/33(H1N1)（简写为WSN）感染过程中对内源AKR1B1蛋白表达量的影响；采用激光共聚焦试验检测干扰AKR1B1表达对流感病毒NP蛋白核转运的影响；利用双荧光素酶报告系统检测过表达AKR1B1对流感病毒聚合酶活性的影响。RT-qPCR检测结果显示si＿AKR1B1＿671和si＿AKR1B1＿721均能极显著下调A549细胞中AKR1B1基因mRNA的转录水平，与对照组相比分别下降95.62%和85.10%(P<0.001)，且不影响细胞活力；western blot检测结果显示si＿AKR1B1＿671能极显著降低细胞中AKR1B1蛋白的表达量（P<0.001），干扰AKR1B1能够增加细胞内病毒蛋白HA、PB2、NP、M1和NS1的表达量；噬斑滴定结果显示，与对照组相比，干扰AKR1B1表达能显著增加流感病毒WSN的病毒滴度，于感染后24 h和48 h病毒滴度分别上升了4.39倍（P<0.01）和5.53倍（P<0.001）；与对照组相比，过表达AKR1B1后，流感病毒滴度于感染后24 h和48 h分别下降了62.59%(P<0.01)和82.78%(P<0.001)；激光共聚焦试验结果显示，干扰AKR1B1表达不影响流感病毒的入核和出核阶段；Western blot检测结果显示，在流感病毒WSN感染过程中，细胞内源AKR1B1蛋白的表达量较为稳定，不受病毒感染的影响；双荧光素酶报告试验结果显示，与对照组相比，过表达AKR1B1后流感病毒的聚合酶活性下降了26.24%(P<0.001)。上述结果首次表明，醛糖还原酶AKR1B1通过抑制流感病毒聚合酶活性抑制流感病毒复制，干扰AKR1B1蛋白表达对流感病毒NP蛋白的入核和出核均无影响，并且流感病毒感染不影响细胞内源性AKR1B1的表达。本研究初步探究了宿主因子AKR1B1参与流感病毒复制的分子机制，为进一步了解流感病毒的复制调控提供了实验数据。

分类号： S852.65

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