含XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1重组菌B-pGp1表达条件的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 冯蕾

作者： 冯蕾;古丽努尔;杨新平

作者机构：

关键词： 地衣芽孢杆菌;高温中性蛋白酶;克隆;表达;大肠杆菌

期刊名称： 皮革科学与工程

ISSN： 1004-7964

年卷期： 2005 年 05 期

页码： 28-31+36

摘要： 用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增得到了高温中性蛋白酶基因Gp1,将扩增的DNA片段与表达载体pET-28a连接构建成重组分泌型表达载体pGp1。转化大肠杆菌BL21,得到重组大肠杆菌B-pGp1。酶活测定结果表明,表达产物具有正常的生物学活性。SDS-PAGE电泳结果显示具有明显的特异性表达条带,单体融合表达产物的分子量为27.0×103,同核酸序列测定所推导的值相符。实验证明,重组质粒在宿主BL21中有很好的稳定性,在有选择压力条件下传代60次基本稳定,传代80次重组质粒保留68%以上。摇瓶实验确定了重组菌的最佳表达条件为IPTG 0.75 mmol/L,培养起始pH=6,培养温度为37℃。重组菌所得酶活为2184μ/mL,是受体菌株酶活的11倍。

分类号： Q814

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