微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨晓娇

作者： 杨晓娇;周鹏;米荣升;黄燕;石凯

作者机构：

关键词： 微小隐孢子虫;类钙调蛋白基因;真核表达质粒

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2014 年 05 期

页码： 485-491

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达。结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础。

分类号： S852.723

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