3种猪细胞因子mRNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王凤雪

作者： 王凤雪;黄双;刘莹;杨勇;孙娜;朱洪伟;张淑琴;程世鹏;温永俊

作者机构：

关键词： 猪;细胞因子;SYBR GreenⅠ;实时荧光定量RT-PCR

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2015 年 42 卷 01 期

页码： 24-31

收录情况： 北大核心

摘要： 为建立猪细胞因子SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中3种重要的猪细胞因子即猪白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、α-干扰素(interferonα,IFN-α)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的基因序列,设计特异引物扩增目的基因。将3种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以3种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明,当标准品稀释度为1×101~1×106拷贝/μL时,3种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均≥0.992。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。应用建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92株免疫的30日龄猪外周血单核细胞(PBMC)中IL-12、IFN-α和TNF-α表达量进行检测,结果发现,免疫了PRRSV TJM-F92株的猪PBMC细胞内3种细胞因子表达量均极显著升高(P<0.01)。研究结果为IL-12、IFN-α和TNF-α的定量分析提供了技术平台。

分类号： Q503

  • 相关文献

[1]鸭坦布苏病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量检测方法的建立. 万春和,朱海侠,施少华,黄瑜,程龙飞,傅光华,陈红梅. 2013

[2]牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用. 韩猛立,蔡日鹏,黄新,何延华,薄新文. 2011

[3]用荧光定量RT-PCR方法检测新型鸭呼肠孤病毒. 韩宏宇,马秀丽,黄兵,李建亮,张玉瑶,于可响,崔言顺. 2015

[4]实时荧光定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立. 赵玲娜,金红岩,梁琳,李刚. 2016

[5]鸭IFN-γ,IL-2 mRNA荧光定量RT-PCR方法的建立及应用. 张盼涛,曾显营,杨婧,李倩倩,田国彬,陈化兰. 2013

[6]猪TIGAR mRNA SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立. 康大成,汤晓艳,李朋颖,颜成英,范成明. 2014

[7]猪源凋亡相关基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立. 李玉明,王刚,汪志艳,刘永刚,涂亚斌,王淑杰,姜成刚,王延群,蔡雪辉. 2013

[8]日粮添加枯草芽胞杆菌对大肠埃希菌感染仔猪免疫功能的影响. 李海花,朱琪,白鹏勋,乔家运,王文杰. 2017

[9]牛IFN-α、IFN-β及IFN-γ mRNA实时SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用. 韩猛立,杨井泉,姚守秀,黄新,薄新文,钟发刚. 2010

[10]牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用. 韩猛立,何延华,黄新,宋天增,薄新文,钟发刚. 2010

[11]禽传染性法氏囊病实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用. 张伟业,薛俊龙,常亚琦,刘昊,任静强. 2018

[12]转基因大麦B-hordein基因荧光定量PCR方法的建立. 李静雯,张正英,王立光,陈军,朱天地. 2020

[13]鸡毒支原体SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立. 孙俊颖,刘志成,孙敏华,李冰玲,沈海燕. 2015

[14]猪流行性腹泻病毒SYBRⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立. 修金生,周伦江,陈如敬,王隆柏,陈小权. 2012

[15]猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用. 沈学怀,潘孝成,巩雅静,张丹俊,赵瑞宏,胡小苗,戴银,侯红艳,周学利,朱传民. 2014

[16]丝状支原体山羊亚种SYBR Green ⅠqRT-PCR快速检测方法的建立. 林裕胜,江锦秀,张靖鹏,游伟,胡奇林. 2017

[17]猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立. 李鹏,郭军庆,金前跃,李青梅,李清州,万博,王选年,王川庆,张改平. 2014

[18]甘薯卷叶病毒LAMP快速检测技术的建立及应用. 李华伟,刘中华,张鸿,许泳清,李国良,林赵淼,许国春,邱永祥,纪荣昌,罗文彬,汤浩,邱思鑫. 2019

[19]火鸡疱疹病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用. 刘杉杉,孙伟,闫敏鑫,黄秀芬,姜良,何诚,李永清. 2015

[20]猪轮状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立. 陈小金,陈建飞,时洪艳,张志榜,冯力. 2010

作者其他论文 更多>>

微信小程序