牛胎儿成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 于永生

作者： 于永生;罗晓彤;张立春;朴庆林

作者机构：

关键词： 牛胎儿成纤维细胞;线虫ω-3脂肪酸去饱和酶;基因转染;脂质体

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2011 年 27 卷 23 期

页码： 12-16

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染牛胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2～3次后利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明,组织块贴壁后7天可获取原代成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9天即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶mRNA在转基因传代细胞中得到有效转录,为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了基础。

分类号： Q813.1

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