新西兰兔Keap1基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 胡波

作者： 胡波;范志宇;魏后军;仇汝龙;陈萌萌;宋艳华;朱伟峰;徐为中;王芳

作者机构： 江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室

关键词： Keap1基因;荧光定量PCR;表达;新西兰兔

期刊名称： 中国兽医杂志

ISSN： 0529-6005

年卷期： 2019 年 09 期

页码： 38-42

收录情况： 北大核心

摘要： 根据GenBank中穴兔Keap1基因序列设计了特异性引物,经PCR扩增,从新西兰兔肝脏中扩增出Keap1基因的C端并连接至T载体上,获得重组质粒pMD-19T-Keap1C。以重组质粒作为质控标准品,通过标准曲线构建、敏感性、特异性和重复性检验,建立了检测兔Keap1基因的实时荧光定量PCR方法,并分析了Keap1基因mRNA在兔各组织中的表达差异。结果显示,Keap1基因检测的Ct值与标准品呈良好的线性关系,扩增效率为103%,R~2>0.99。利用建立的实时荧光定量PCR方法对新西兰兔各组织中Keap1基因mRNA表达水平进行检测,结果显示,Keap1基因在脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中均有表达,且肝脏中表达量最高,脾脏中表达量最低。本试验建立了兔Keap1基因的荧光定量PCR方法并检测了其mRNA在兔各组织中的表达情况,为后续开展兔Keap1-Nrf2-ARE信号通路的研究奠定了基础。

分类号： S829.1

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