巴西橡胶树地上部地下部均一化酵母双杂交cDNA文库构建及评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈洪举

作者： 陈洪举;张浩;高乐;何鹏;韦家少

作者机构：

关键词： 巴西橡胶树;地上部和地下部;酵母双杂交cDNA文库;均一化

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2017 年 14 卷 02 期

页码： 468-473

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 缺磷是影响橡胶树产量的主要因素之一,蛋白泛素化在其中发挥了重要作用。为研究泛素化在橡胶树低磷胁迫中的调控作用,本研究分别以巴西橡胶树"热研7-33-97"组培苗地上部和地下部为材料,构建酵母双杂交文库,并对其进行了评价。首先用CTAB法大量提取橡胶树地上部和地下部总RNA,再用PROMEGA试剂盒处理获得纯化的m RNA,然后采用SMART誖技术和LD-PCR合成双链cDNA(ds-cDNA),继而通过双链特异性核酸酶(DSN)对ds-cDNA进行均一化处理,再经CHROMA SPIN+TE-400柱子纯化长片段的cDNA,最后将获得的长片段cDNA和线性化载体p GADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞,构建均一化酵母双杂交文库。结果显示:地上部文库滴度8×107cfu/m L,插入片段≥0.5 kb的重组率为100%;地下部文库滴度7×107cfu/m L,插入片段≥0.5 kb的重组率为87%。该结果表明文库已成功构建,可以用于进一步实验。

分类号： S794.1`Q943.2

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