甘薯卷叶病毒LAMP快速检测技术的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李华伟

作者： 李华伟;刘中华;张鸿;许泳清;李国良;林赵淼;许国春;邱永祥;纪荣昌;罗文彬;汤浩;邱思鑫

作者机构：

关键词： 甘薯;甘薯卷叶病毒(SPLCV);环介导等温扩增技术(LAMP);SYBR GreenⅠ

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2019 年 006 期

页码： 1133-1140

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 甘薯卷叶病毒(Sweet potato leaf curl virus, SPLCV)是甘薯(Ipomoea batatas)生产上重要的病毒病之一,建立SPLCV快速检测方法,对该病的诊断及技术防控至关重要.本研究以甘薯卷叶病毒基因组的外壳蛋白基因(coat protein, cp)为靶序列,设计了一组环介导恒温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)特异性引物,以SYBR GreenⅠ作检测指示剂,通过优化反应条件,建立了一种甘薯卷叶病毒的LAMP可视化快速检测方法,该方法在65℃的恒温条件下反应1 h完成检测.特异性检测结果表明,只有感染SPLCV的样品在指示剂的作用下呈现绿色,且扩增产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳出现梯形条带,而与感染其他甘薯DNA病毒、番茄黄花曲叶病毒(Tomato yellow mosaic leaf curl virus, TYLCV)、烟草曲叶病毒(Tobacco leaf curl virus, TLCV) 3种DNA病毒均无交叉反应,表明该方法具有较高的特异性;灵敏度检测结果表明,该方法的最低检测限为1 pg/μL基因组DNA,是普通PCR的10倍,说明该方法灵敏度较高.因此本研究建立的甘薯卷叶病毒环介导等温扩增技术具有扩增快速、特异性高、简便、不需要特殊仪器,肉眼可视化观察结果,适合田间甘薯卷叶病毒样品及基层部门的快速检测.

分类号： S435.31

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