文献类型： 中文期刊
第一作者： 阎晓菲
作者： 阎晓菲;孔苗;韩红玉;董辉;黄兵
作者机构：
关键词： 堆型艾美耳球虫;ATP酶;遗传进化;生物信息学;原核表达
期刊名称： 中国动物传染病学报
ISSN： 1674-6422
年卷期： 2019 年 27 卷 003 期
页码： 65-73
摘要： 为研究堆型艾美耳球虫阳离子转运ATP酶(Eimeria acervulina Na+-K+-ATPase,EaNKA)蛋白的生物学功能,根据EaNKA基因(GenBank登录号:EU590120.1)设计1对特异性引物,以堆型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库为模板,对EaNKA基因进行PCR扩增,将PCR扩增产物克隆入pUCM-T载体并进行测序鉴定,将测序获得的EaNKA基因编码蛋白进行生物信息学分析.EaNKA基因全长1157 bp,位于第81-368 bp之间,编码236个氨基酸,分子量约为25 kDa.编码蛋白主要位于内质网,不具有信号肽,编码蛋白主要位于内质网,不具有信号肽,有12个结构功能域,2个跨膜区,位于多肽N端的7个抗原表位.Blast分析显示其编码蛋白与堆型艾美耳球虫阳离子转运ATP酶相关蛋白序列(XP013248919、ACB97673)的同源性为100%.构建重组质粒pET32a(+)-EaNKA并进行测序鉴定,然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞,进行SDS-PAGE和Western blot表达鉴定.结果显示,构建的重组质粒可在原核细胞中成功表达45 kDa的融合蛋白.本研究成功获得EaNKA基因的全长序列,并在原核细胞中成功表达,为今后研究该基因的功能及筛选基因工程疫苗候选分子奠定基础.
分类号： S852.723
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