稳定表达CD163蛋白的猪肺泡巨噬细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵凯

作者： 赵凯;冯磊;郑其升;侯继波;陈溥言

作者机构：

关键词： CD163;猪肺泡巨噬细胞;重组细胞系

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 03 期

页码： 110-115

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以RT-PCR方法从原代猪肺泡巨噬细胞中获得CD163 cDNA序列,然后测序鉴定,对突变碱基进行修正,将修正后碱基序列克隆入真核表达载体pcDNA4.0中,构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-CD163,通过BamHⅠ/NotⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。使用脂质体2000将pcDNA4.0-CD163转染猪肺泡巨噬细胞系3D4/21(CRL-2843),通过Zeocin抗性筛选,建立稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系。RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)检测结果表明CD163在mRNA和蛋白质水平均已表达。通过Zeocin抗性筛选,共获得8株表达CD163的重组细胞株,IFA检测结果表明表达的CD163定位于重组细胞的细胞膜表面。去除筛选抗性后连续传代10代,间接免疫荧光检测结果确定重组细胞株在10代内性状稳定,说明稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系构建成功。

分类号： S858.28

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