舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘礼辉

作者： 刘礼辉;胡蕾;杨圆圆;方伟;林强;付小哲;梁红茹;赵永亮;李宁求

作者机构：

关键词： 舒伯特气单胞菌;rpoD基因;实时荧光定量PCR

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2019 年 008 期

页码： 17-24

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]建立一种快速、灵敏的舒伯特气单胞菌(Aeromanas schubertii)检测方法.[方法]以舒伯特气单胞菌rpoD(RNA polymerase sigma-70 factor)为靶标基因,设计特异性引物及TaqMan探针,建立舒伯特气单胞菌的TagMan实时荧光定量PCR检测方法,同时验证该方法的特异性、灵敏度、重复性,并用该方法对50份临床样品进行检测,验证其应用效果.[结果]含舒伯特气单胞菌rpoD基因的质粒拷贝数与循环阈值(Ct)的标准曲线相关系数为1.000,扩增效率为94.705%.实时荧光定量PCR检测方法只对舒伯特气单胞菌的靶基因检测结果呈阳性,对嗜水气单胞菌(Aeromanas hydrophila)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、诺卡氏菌(Nocardia seriolae)等其他14种致病菌的检测结果均为阴性,具有高度特异性;对舒伯特气单胞菌重组质粒和纯培养细菌的检出灵敏度分别为4.76拷贝/μL和15 CFU/mL;批内和批间重复性试验变异系数分别为0.95%和1.05%.50份临床样品检测结果显示,该方法阳性样品检出率为22%,高于传统细菌分离方法(10%)的检出率.[结论]建立的舒伯特气单胞菌实时荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,适用于舒伯特气单胞菌的快速诊断检测和流行病学调查.

分类号： S941.42

  • 相关文献

[1]泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)病原温和气单胞菌(Aeromonas sobria)分子鉴定及耐药性研究. 姚东瑞,邴旭文,朱明,毕可然,陈丽,张晓君. 2010

[2]鳜源致病性舒伯特气单胞菌的分离鉴定及药敏试验. 陈红莲,王永杰,鲍俊杰,孙雯,张静,侯冠军,程云生. 2023

[3]黑水虻虫浆对杂交鳢血清免疫、抗氧化指标和肠道形态、菌群及抗病力的影响. 谢雨桐,朱喜锋,李诗洋,黄燕华,刘春,鲁慧杰,王绥涛,王国霞. 2023

[4]舒伯特气单胞菌研究进展. 刘春,曹际振,张德锋,王庆,石存斌,常藕琴,林蠡. 2021

[5]四株杂交鳢致病性舒伯特气单胞菌特性及致病性比较. 何山,谭爱萍,姜兰,赵飞,刘付翠,张瑞泉,邓玉婷. 2019

[6]杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)内脏类结节病病原菌的分离、鉴定与特性分析. 刘春,李凯彬,王庆,常藕琴,梁慧丽,王芳,潘德博,石存斌,吴淑勤. 2012

[7]乌鳢IL-1RAcP的分子特征及其对两种病原菌感染的免疫应答. 李冬琦,崔正伟,赵飞,邓玉婷,谭爱萍,黄志斌,姜兰. 2022

[8]乌鳢源舒伯特气单胞菌生物学特性及其药物敏感性分析. 莫金凤,姜兰,吴灶和. 2016

[9]鱼致病性舒伯特气单胞菌双重PCR检测方法的建立. 刘春,李凯彬,王庆,王芳,曾伟伟,石存斌,吴淑勤. 2014

[10]黄瓜CMV复制酶基因相对表达定量PCR方法的建立. 王军辉,张桂华,杜胜利,王永琦,张显. 2010

[11]利用不同实时定量PCR方法分析相对基因表达差异. 余舜武,刘鸿艳,罗利军. 2007

[12]实时荧光定量PCR在动物疫病中的应用. 杨丽娟,冉丹丹. 2013

[13]菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法的建立. 胡加谊,李向宏,罗志文,范鸿雁,张治礼. 2015

[14]柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用. 宋雅琴,赵小龙,白先进,邓崇岭. 2014

[15]冠突散囊菌不同生长阶段MAT基因的表达量变化. 葛永怡,吴石平,谭玉梅,刘永翔,刘作易. 2015

[16]发生马铃薯立枯病土壤中立枯丝核菌的荧光定量PCR快速检测. 李瑞琴,刘星,邱慧珍,张文明,张春红,王蒂,张俊莲,沈其荣. 2013

[17]湿度对田间自然热罩防治柑橘黄龙病的影响. 林雄杰,范国成,胡菡青,王贤达,Yulu Xia,蔡子坚,刘波. 2014

[18]分子生物学手段检测转Bt基因棉花中Cry杀虫蛋白的定性和定量方法. 李衍亮,方志翔,游静. 2014

[19]龙眼TPI基因的克隆及其在体胚发生过程中的表达分析. 赖呈纯,赖钟雄,方智振,林玉玲,姜顺日. 2012

[20]种子传播黄龙病可能性研究. 娄兵海,白先进,邓崇岭,陈宜超,赵小龙,李贤良. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序