猪脑心肌炎病毒2A蛋白的原核表达与纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 韩若婵

作者： 韩若婵;梁瑞英;左玉柱;萧飒;崔尚金

作者机构：

关键词： 脑心肌炎病毒(EMCV);2A蛋白;原核表达;纯化

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2020 年 011 期

页码： 3454-3459

收录情况： 北大核心

摘要： 本试验对猪脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)2A蛋白进行原核表达和纯化.采用大肠杆菌原核表达系统,将EMCV 2A基因插入原核表达载体pET-28a-sumo中构建重组原核表达质粒pET28a-EMCV-2A,经PCR和测序鉴定无误.将重组原核表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,超声破碎后,2A蛋白的表达主要以包涵体形式存在.通过优化蛋白表达条件,使目的蛋白能够实现可溶性表达.利用磁珠纯化方法对重组蛋白进行纯化,并以SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定.结果显示,本试验成功构建2A的重组表达质粒;重组蛋白分子质量约为25 ku,与预期大小一致;IPTG浓度1.0 mmol/L、16℃低温诱导16 h为最佳诱导条件,约有50%的蛋白呈现可溶性表达;纯化后获得2A重组蛋白.本试验通过对EMCV 2A蛋白的原核表达及纯化,成功获得纯度较高的EMCV 2A蛋白,为进一步阐明EMCV的分子致病机制以及研发基因疫苗和抗病毒药物奠定基础.

分类号： S852.65

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