单核细胞增生李斯特菌sRNA伴侣分子hfq的基因克隆、表达及纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 彭叶龙

作者： 彭叶龙;乔军;孟庆玲;谢堃;陈诚;刘田莉;马玉;才学鹏;陈创夫

作者机构：

关键词： 单核细胞增生李斯特菌;hfq基因;sRNA伴侣分子;克隆;表达;纯化

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2014 年 29 卷 05 期

页码： 83-87

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为克隆、表达单核细胞增生李斯特菌sRNA分子伴侣蛋白hfq基因,并纯化重组蛋白,通过PCR的方法从单核细胞增生李斯特菌基因组DNA中扩增出hfq基因,将扩增产物克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,再将hfq基因亚克隆至表达载体pET-32a(+)中,成功构建pET-32a(+)-hfq原核表达载体。然后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG进行诱导表达,对表达蛋白进行可溶性分析,并采用Ni-NTA纯化目的蛋白。结果显示:克隆的hfq基因全长234 bp,编码77个氨基酸,通过SDS-PAGE可以检测到27 kDa的蛋白特异性条带;并从上清中纯化得到了Hfq融合蛋白。为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。

分类号： S852.61`Q78

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