犬源干扰素刺激基因ISG15和IFIT2荧光定量PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王改丽

作者： 王改丽;程悦宁;张淑琴;王建科;王超;孙娜;易立;程世鹏

作者机构：

关键词： 犬瘟热病毒;干扰素刺激基因;ISG15;IFIT2;荧光定量PCR

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2020 年 40 卷 06 期

页码： 1119-1123+1135

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 干扰素刺激基因在抗病毒及调节IFN信号通路的过程中具有重要作用。本课题组前期对犬瘟热病毒(CDV)感染宿主前后全转录组进行测序分析,发现干扰素刺激基因ISG15和IFIT2明显上调,为了进一步探究ISG15和IFIT2对CDV感染的影响,本研究设计合成了犬源ISG15、IFIT2和持家基因GAPDH的特异性引物,分别进行PCR扩增,构建质粒标准品,建立荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验。结果表明,犬源ISG15、IFIT2和GAPDH的荧光定量PCR标准曲线的相关性R~2均大于0.98,表明线性关系良好。ISG15、IFIT2和GAPDH的融解曲线均为单峰,扩增产物单一,且峰值一致,表明建立的荧光定量PCR方法特异性良好。组内与组间的变异系数均小于0.2%,表明该方法重复性较好。对CDV感染宿主细胞前后的ISG15和IFIT2 mRNA表达水平进行检测,发现CDV感染后ISG15和IFIT2的表达量升高,表明ISG15和IFIT2在CDV感染过程中发挥重要作用。该结果为针对CDV与干扰素抗病毒研究的开展提供重要的技术手段,并为进一步揭示CDV致病的分子机制奠定基础。

分类号： S852.65

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