猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白部分片段的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周俊明

作者： 周俊明;何孔旺;倪艳秀;俞正玉;茅爱华;吕立新;温立斌;张雪寒;郭容利;李彬;王小敏

作者机构：

关键词： 猪链球菌2型;MRP;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 01 期

页码： 86-91

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别。以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法。该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1∶50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清。当效价(S/P)≥0.22时,判定待检血清样品为阳性;当S/P<0.22时,判定待检血清样品为阴性。运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14～28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异。

分类号： S858.28

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