siRNA干扰绵羊胚胎成纤维细胞Lig4基因增加同源重组载体重连修复效率

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王伟

作者： 王伟;王玉霜;黄兰兰;简子健;王新华;刘守仁;皮文辉

作者机构：

关键词： siRNA;Lig4基因;同源重组;绵羊胚胎成纤维细胞

期刊名称： 遗传

ISSN： 0253-9772

年卷期： 2016 年 38 卷 09 期

页码： 831-839

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在动物细胞中,抑制非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)修复途径,可以提高同源重组(Homologous recombination,HR)修复基因组双链断裂(Double-strand brakes,DSBs)的发生概率。为了提高绵羊胚胎成纤维细胞的HR效率,针对NHEJ修复途径中的关键因子Lig4(DNA ligase 4)基因,本文设计合成4个具有靶向性的siRNA(Small interfering RNA)。绵羊胚胎成纤维细胞经电转染导入si RNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测,筛选出有效抑制Lig4基因表达的2个siRNA。应用质粒重连法检测HR修复效率,将I-SceⅠ酶线性化的HR质粒和si RNA共转染绵羊胚胎成纤维细胞,经72 h培养及流式细胞仪检测,与对照组细胞比较,结果表明HR质粒重连效率提高了3~4倍。瞬间干扰Lig4基因的表达可提高HR质粒重连效率,为改善绵羊胚胎成纤维细胞基因打靶效率提供理论基础。

分类号： Q78

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