柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因的克隆、原核表达及酶活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 廖申权

作者： 廖申权;吴彩艳;戚南山;李娟;吕敏娜;张健騑;谢明权;孙铭飞

作者机构：

关键词： 柔嫩艾美耳球虫;5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶;克隆;原核表达;酶活性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2015 年 46 卷 04 期

页码： 631-636

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在克隆柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶(EtDXR)基因,初步分析EtDXR的酶活性。根据EuPathDB数据库信息注释、拼接Etdxr基因序列,设计特异性引物扩增Etdxr基因,构建原核表达质粒pCold I-EtDXR,转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE及Western blot分析,纯化rEtDXR,对rEtDXR进行酶活性分析,测定pH和Mg2+离子浓度对酶活性的影响。结果显示,Etdxr基因完整编码序列为1 746bp,氨基酸序列具有与其他物种高度保守的酶活性中心;成功构建原核表达质粒pCold I-EtDXR,SDS-PAGE以及Western blot分析显示,得到约50ku的蛋白质;利用直接检测底物NADPH消耗速率的方法分析EtDXR酶活性,结果显示,不同pH和离子浓度对EtDXR的酶活性有显著影响,其最佳的酶反应条件为pH 7.0,Mg2+离子浓度4.5mmol·L-1。本研究为进一步以EtDXR为药靶筛选抗球虫先导化合物奠定了基础。

分类号： S852.7

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