毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 卞庆松

作者： 卞庆松;韩红玉;赵其平;姜连连;董辉;闫晓菲;张建哲;黄兵

作者机构：

关键词： 鸡;球虫;毒害艾美球虫;孢子化卵囊;cDNA文库;SMART技术

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2008 年 38 卷 03 期

页码： 196-199

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA,采用SMART技术,在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA,经LD-PCR扩增合成双链cDNA(ds cDNA)。经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切,过CHROMA SPIN-400TM柱去除小于400 bp的片段,与λTriplEx2TM噬菌体载体连接,用GigapackⅢGoldTM载体蛋白包装,构建了cDNA噬菌体表达文库。经测定,原始文库容量为4.72×106pfu/mL,扩增后的文库容量为2.62×1010pfu/mL,重组率为97.5%,插入片段为500~1 100 bp。证实,该文库质量良好,为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础。

分类号： S852.7

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