非洲猪瘟病毒360-12L蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 蒋亚君

作者： 蒋亚君;陈世钰;鑫婷;郭晓宇;王召阳;刘雪婷;崔帅;王洋;朱鸿飞;贾红

作者机构： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;华南农业大学

关键词： 非洲猪瘟病毒(ASFV);原核表达;12L重组蛋白;多克隆抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 01 期

页码： 352-360

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】获得抗原性好的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus)12L蛋白用于ASFV血清学诊断技术研究。【方法】根据GenBank ASFV参考序列(登录号:NC_044959.2)合成360-12L基因,并插入pET-28a(+)载体,构建原核表达质粒pET-28a-12L,将经测序鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导培养,筛选最佳诱导温度,同时分析其可溶性。随后通过亲和层析纯化蛋白,并对所获得的12L重组蛋白进行SDS-PAGE分析。将获得的12L重组蛋白作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,以获得鼠抗ASFV 12L蛋白的多克隆抗体,通过间接ELISA方法测定所制备的多克隆抗体效价,并用间接免疫荧光试验进行验证。【结果】成功构建了ASFV 12L蛋白原核表达质粒,重组菌pET-28a-12L-BL21在37℃6 h时表达量较高,主要以包涵体形式表达,可在54.7 ku处出现明显条带。间接ELISA结果显示,制备的鼠抗ASFV 12L蛋白多克隆抗体效价>1∶512 000,间接免疫荧光试验结果表明,所制备的鼠抗ASFV 12L蛋白多克隆抗体具有良好的特异性,可特异性识别12L重组蛋白。【结论】原核表达的12L重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的鼠抗ASFV 12L蛋白的多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,为进一步研究12L蛋白的生物学功能、ASFV血清学诊断技术和疫苗研究提供生物材料。

分类号： S852.651

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