绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建及在其原代成纤维细胞中的瞬时表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陆健

作者： 陆健;宋正海;吕延飞;赵福平;张莉

作者机构：

关键词： myostatin;绵羊成纤维细胞;真核表达载体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2012 年 39 卷 05 期

页码： 14-19

收录情况： 北大核心

摘要： Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育。为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因,将其cDNA终止密码子TGA删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经XhoⅠ/SacⅡ双酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染绵羊原代成纤维细胞,观测荧光表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、蛋白质表达情况。结果表明,成功克隆绵羊MSTN基因,通过PCR方法在MSTN阅读框两端引入了XhoⅠ和SacⅡ克隆位点,成功构建pAcGFP-MSTN融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染绵羊成纤维细胞24h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,通过RT-PCR扩增出1138bp的转录产物,并用Western blotting检测到78ku目的蛋白的表达。本试验为研究MSTN基因在成纤维细胞和脂肪分化调控中的具体机制奠定基础。

分类号： S826`Q78

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