一种快速简便的伪狂犬病病毒EP0基因RT-qPCR检测方法的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张丽荣

作者： 张丽荣;阮可悦;童武;李国新;高飞;单同领;于海;童光志;郑浩

作者机构：

关键词： 伪狂犬病病毒;EP0基因;RT-qPCR

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年 30 卷 004 期

页码： 81-86

收录情况： 北大核心

摘要： 伪狂犬病病毒EP0基因编码区与病毒长的潜伏相关转录物(LLT)互补,这干扰了EP0基因表达的定量分析.本研究根据新近证实的EP0剪接体的序列,设计合成一对特异性引物,以GAPDH作为内参,建立一种SYBR Green实时荧光定量PCR检测EP0表达.提取PRV感染细胞的总RNA,分析了DNaseⅠ消化处理、不同反转录引物对检测结果的影响,并且利用该方法检测了EP0基因在感染细胞中的表达特征.结果显示:建立的RT-qPCR溶解曲线单一,且重复性好;PRV基因组DNA不影响RT-qPCR的检测,总RNA不经过DNaseⅠ消化可直接用于EP0的表达检测;随机引物比Oligo(dT)更适合用于反转录,能获得更灵敏的EP0检测结果;EP0基因在感染细胞8 h后表达量达到最高.小鼠三叉神经组织EP0定量检测发现LLT启动子缺失病毒与亲本病毒相比表达量明显降低.上述结果显示,本文成功建立了检测伪狂犬病病毒EP0基因快速简便的方法,为EP0基因的研究提供了有力手段.

分类号： S852.65

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