H5N1亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及其生物活性鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张晓霁

作者： 张晓霁;刘明;刘春国;杨涛;张云

作者机构：

关键词： 禽流感病毒;血凝素基因;杆状病毒;表达

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2007 年 27 卷 03 期

页码： 42-46

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 经RT-PCR扩增了H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片段,限制性内切酶酶切后将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体,经酶切鉴定及测序,筛选出阳性重组转座载体pFastBac-H5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-H5。rBacmid-H5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:分子量约63kDa重组血凝素蛋白(rH5)在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。rH5具有血凝活性,而且其血凝活性能够被H5N1禽流感病毒高免血清所抑制;rH5免疫鸡诱导产生针对H5N1禽流感病毒亚型特异的血凝抑制抗体,说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。

分类号： Q78`S852.65

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