差异柠檬酸杆菌GXW-1 β-葡萄糖苷酶的酶学性质及分子改造

文献类型： 中文期刊

第一作者： 江民华

作者： 林厚民;尹金阳;王子龙;庞浩;黄日波;杜丽琴

作者机构：

关键词： 差异柠檬酸杆菌GXW-1;β-葡萄糖苷酶;酶学性质;酶分子改造

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2017 年 57 卷 03 期

页码： 363-374

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】筛选鉴定1株产β-葡萄糖苷酶的菌株,克隆、表达该菌株中的β-葡萄糖苷酶基因,研究重组酶的酶学性质并进行分子改造。【方法】在自然界中采集土样,筛选到1株具有β-葡萄糖苷酶活性的菌株,对野生菌进行16S rDNA鉴定,比对分析Gen Bank数据库中与野生菌同属的β-葡萄糖苷酶基因序列,设计简并引物PCR扩增基因保守区;设计引物扩增目的基因,以pQE30为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌中进行诱导表达;采用镍亲和层析对重组酶进行纯化,研究其酶学性质;采用易错PCR和定点随机突变相结合的方法对野生型β-葡萄糖苷酶进行分子改造。【结果】一个来自于差异柠檬酸杆菌GXW-1的β-葡萄糖苷酶基因被克隆并在大肠杆菌中表达。酶学性质研究结果表明该β-葡萄糖苷酶CBGL的最适温度为45°C,最适p H为6.0,V_(max)值是(0.1704±0.0073)μmol/(mg·min),K_(cat)值为(0.2380±0.0102)/s。CBGL能水解α-pNPG、甜菊苷、黄豆苷和染料木苷。对野生酶进行分子改造,获得V_(max)是野生酶2.54倍的突变体W147F。【结论】CBGL不仅具有β-1,4-糖苷键水解能力,还可能具有一定的α-糖苷键水解酶活性。此外,CBGL还能够水解天然底物甜菊苷、黄豆苷和染料木苷。这些特性表明该β-葡萄糖苷酶在理论研究及在工业中有一定的应用价值。

分类号： TS201.25

  • 相关文献

[1]Bacillius naganoensis普鲁兰酶基因的分子改造及酶学性质研究. 谢能中,曹薇,王青艳,米慧芝. 2014

[2]烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析. 欧阳浩淼,黄日波,陈东,金城. 2013

[3]产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶菌株的筛选及酶学性质研究. 齐斌,刘贤金. 2007

[4]嗜热古菌Infirmifilum uzonense来源的双功能高温β-葡萄糖苷酶IuBgl3的原核表达及酶学性质分析. 刘鑫涵,沈风飞,石鹏君,刘慧芹. 2022

[5]嗜酸古菌Cuniculiplasma divulgatum来源的GH1家族中温β-葡萄糖苷酶CdBglA的原核表达及酶学性质分析. 何金见,沈风飞,刘鑫涵,杨天均,李宝通,石鹏君,刘慧芹,曾婉宁. 2023

[6]草莓果实中BG基因的克隆及功能分析. 郭正兵,韩柏明,霍恒志. 2016

[7]高糖土壤微生物宏基因组文库的构建及β-葡萄糖苷酶基因鉴定. 杜丽琴,庞浩,马贵,韦宇拓,黄日波. 2013

[8]响应面法分析优化米曲霉产β-葡萄糖苷酶液体发酵培养基. 王青艳,刘演景,申乃坤,陈桂光,梁智群. 2012

[9]诱变条件对黑曲霉β-葡萄糖苷酶的影响. 佟俊生,姚远,任大明,崔智博. 2016

[10]共表达3种纤维素降解酶的转基因小鼠模型的建立与分析. 何祖勇,刘志国,孙燕霞,丛佩清,陈瑶生. 2016

[11]植物β-葡萄糖苷酶的研究进展. 王晨,李家儒. 2021

[12]三个黔育茶树品种的主要酶活性及化学成分比较分析. 王雨鑫,杨慧,刘建军,杨春,陈正武,马友力,邓燕莉. 2020

[13]一种来源嗜热古菌的耐热β-葡萄糖苷酶制备鸢尾苷元的工艺研究. 王仲,方伟,董青,李丽娜. 2020

[14]瑞氏木霉中β-葡萄糖苷酶基因功能研究进展. 周庆新,戴炳业,陈蕾蕾,刘孝永,裘纪莹. 2014

[15]利用黑曲霉β-葡萄糖苷酶催化香兰素葡萄糖苷水解. 孙海彦,王茜,彭明. 2011

[16]斑玉蕈β-葡萄糖苷酶基因的序列分析及皂苷对基因表达的影响. 陈辉,冯志勇,冯川,陈明杰,汪虹,王倩,宋晓霞,赵妍,叶明,张津京. 2017

[17]怀枝荔枝中游离态和键合态风味物质的检测分析. 李春美,郝菊芳,钟慧臻,徐玉娟. 2010

[18]黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)抗感嘧霉胺菌株胞外酶活性比较研究. 赵晓军,任璐,殷辉,周建波. 2014

[19]葡萄酒酿造过程中产β-葡萄糖苷酶酵母菌研究进展. 汤晓宏,胡文效,蒋锡龙,刘静,魏彦锋,慕茜. 2020

[20]真菌来源第3家族β-葡萄糖苷酶催化机理初步研究. 夏伟,石鹏君,柏映国,钱立纯,罗会颖,姚斌. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序