新西兰白兔γ-干扰素在昆虫细胞中的表达及其活性测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王芳

作者： 王芳;胡波;任雪枫;范志宇;张则斌;徐为中;何孔旺

作者机构：

关键词： 家兔;γ-干扰素;克隆;重组杆状病毒

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2010 年 25 卷 03 期

页码： 13-17

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 用RT-PCR方法对ConA刺激后的新西兰白兔外周血淋巴细胞(PBMC)扩增家兔γ-干扰素(IFN-γ)基因并进行测序,测序结果显示,与GenBank公布的序列核苷酸同源性达到99.4%～99.6%,氨基酸同源性为98.8%～99.4%;然后通过克隆、转化将家兔γ-干扰素基因转入转移载体pFastBacTM1,得到重组转移载体pFastBacTM1-IFN-γ,用pFastBacTM1-IFN-γ转化含有穿梭载体Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经筛选得到重组穿梭载体Bacmid-IFN-γ,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV-Bac-IFN-γ,经RT-PCR鉴定,结果显示重组IFN-γ在Sf9昆虫细胞中得到表达。用兔IFN-γELISA试剂盒测得重组兔IFN-γ的浓度为1 950 pg/mL。细胞病变抑制法结果显示,重组兔IFN-γ在MDCK上显示了较高的抗病毒活性,并测得重组兔IFN-γ的活性约为5.12×105 U/mg。

分类号： S829.1

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