牛Mx1基因重组慢病毒载体的构建及沉默Mx1细胞的获得

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王洪梅

作者： 王洪梅;刘文浩;夏咸柱;胡桂学;何洪彬

作者机构：

关键词： 牛Mx1基因;胎儿原代气管上皮细胞;RNA干扰

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2016 年 36 卷 12 期

页码： 2030-2034

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR技术从牛肾细胞中扩增出Mx1基因,构建牛Mx1基因过表达重组载体;针对牛Mx1mRNA序列设计shRNA引物对,构建针对牛Mx1的RNAi载体。将牛Mx1的过表达载体和RNAi载体共转染293T细胞,利用Western blot方法检测牛Mx1蛋白的表达情况,筛选有效沉默牛Mx1的shRNA;将有效沉默Mx1的RNAi载体转染牛胎儿气管原代上皮细胞,经流式细胞分选,Western blot检测,获得沉默牛Mx1的稳定细胞系。结果表明,成功构建了牛Mx1过表达重组载体pcDNA3.1-Mx1和RNAi载体RNAi-Mx1A、RNAi-Mx1B、RNAi-Mx1C,筛选到RNAi-Mx1A沉默牛Mx1效果最好;经流式细胞分选和Western blot检测,获得有效沉默牛Mx1的牛胎儿气管原代上皮细胞,为进一步探讨牛Mx1抗病毒作用及机制的研究奠定试验基础。

分类号： S823

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