宿主Rac1对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘展

作者： 刘展;朱顺海;赵其平;黄兵;韩红玉;黄文浩;姚亚文;董辉

作者机构：

关键词： 球虫病;柔嫩艾美耳球虫;Ras相关的C3肉毒素底物1;NSC23766;体外入侵试验

期刊名称： 复旦学报(自然科学版)

ISSN： 0427-7104

年卷期： 2021 年 006 期

页码： 759-767

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： Ras相关的C3肉毒素底物1（Rac1）是Rho家族的一种小分子GTP酶,本文研究了宿主Rac1对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的影响.克隆鸡Rac1基因并构建原核重组质粒pGEX-4T-1-Rac1,表达、纯化重组蛋白Rac1-GST,用Western blot对重组蛋白进行验证;使用qPCR、Western blot和间接免疫荧光分别对柔嫩艾美耳球虫子孢子感染后DF-1细胞中Rac1的mRNA转录水平、蛋白表达水平和分布变化进行了检测;并利用体外入侵试验检测了Rac1多克隆抗体及其抑制剂NSC23766处理DF-1细胞后对子孢子入侵的影响.结果显示:成功克隆了579 bp的Rac1基因,并获得47.5 kDa的重组Rac1-GST蛋白.qPCR结果显示,在柔嫩艾美耳球虫子孢子感染DF-1细胞60～72 h时,DF-1细胞中Rac1的转录水平显著升高,但Western blot结果显示,Rac1蛋白的表达水平在感染前后无明显差异.间接免疫荧光的结果显示,子孢子入侵DF-1细胞15～30 min时,Rac1的荧光强度在子孢子顶端增加.体外入侵试验结果显示,用Rac1多克隆抗体孵育DF-1细胞后对子孢子的入侵没有明显影响,而利用NSC23766抑制Rac1的内源性活性后能够显著降低子孢子的入侵效率,且抑制作用与抑制剂的使用浓度成正比.以上结果表明:宿主Rac1的内源性活性会影响柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的效率,在子孢子的入侵过程中具有积极作用.

分类号： S852.723

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