J亚群禽白血病病毒gp85蛋白的真核表达纯化及其生物学活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张瑶

作者： 张瑶;任超琪;于蒙蒙;高祥;管晓璐;祁小乐;王永强;刘长军;王笑梅;高玉龙

作者机构：

关键词： J亚群禽白血病病毒;gp85;表达;纯化;生物学活性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2017 年 10 期

页码： 815-819

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： gp85蛋白是禽白血病病毒(ALV)的囊膜表面蛋白,含有病毒-受体决定簇,通过识别和结合受体介导病毒侵入宿主细胞。为表达具有正确构象和生物学活性的J亚群ALV(ALV-J)gp85蛋白并对其生物活性进行分析,本研究以pCAGGS为载体,构建N端带有信号肽编码序列、C端融合Fc编码序列的gp85重组表达质粒pCAGGS-s-gp85-Fc,将其转染293T细胞进行瞬时表达,收集细胞培养液。SDS-PAGE结果表明,gp85-Fc蛋白高效表达,并且经Protein A亲和层析纯化得到高纯度的gp85-Fc蛋白。利用HRV 3C蛋白酶切除Fc标签并且进行分子筛纯化,得到纯度高于90%的gp85蛋白单体。经过流式细胞仪检测,表达的可溶性gp85蛋白能够与ALV-J受体特异性结合。病毒感染阻断试验结果显示,gp85蛋白能够通过封闭受体阻断ALV-J进入DF-1细胞,并且呈现剂量依赖性,在100μg/mL时仍能阻断70%以上的病毒侵入。本研究可溶性的、具有生物学活性的gp85蛋白的制备为体外研究病毒感染宿主细胞机制奠定了的基础。

分类号： S852.65

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