细粒棘球蚴Eg HSP20蛋白基因的分子特征、表达及其反应原性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈英

作者： 陈英;乔军;孟庆玲;钟文强;刘田莉;贡莎莎;王熙凤;黄运福;才学鹏

作者机构：

关键词： 细粒棘球蚴;Eg HSP20抗原基因;克隆;表达;反应原性

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2018 年 07 期

页码： 1547-1552

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】本文构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)HSP20基因的重组表达载体并表达、纯化重组蛋白,研究其反应原性。【方法】根据Gen Bank中Eg HSP20蛋白基因c DNA序列设计特异性引物,以细粒棘球蚴Eg头节总RNA为模板,进行RTPCR扩增,将PCR产物克隆至p MD19-T载体,测序验证后,将Eg HSP20抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞内,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。【结果】Eg HSP20 c DNA全长945个核苷酸,编码314个氨基酸。该多肽含有1个N端糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,5个PKC磷酸化位点,10个CKⅡ磷酸化位点;抗原表位区集中在39~53位和120~168位。SDS-PAGE检测显示,重组菌可表达分子量为51 k Da的重组蛋白;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg HSP20抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应。【结论】证实Eg HSP20蛋白具有较强的反应原性,为进一步利用Eg HSP20重组蛋白作为Eg感染诊断中候选标识分子奠定了前期基础。

分类号： S852.734

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