限制性内切酶介导的粉红粘帚霉67-1转化体系构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 许梦秋

作者： 姜杰;孙漫红;谢响明;李世东

作者机构：

关键词： 粉红粘帚霉;原生质体转化;限制性内切酶介导整合;潮霉素抗性

期刊名称： 中国生物防治学报

ISSN： 2095-039X

年卷期： 2013 年 002 期

页码：

收录情况： 北大核心

摘要： 本文将含有潮霉素抗性基因(hph)的质粒pAN7-1通过限制性内切酶介导法转入植病生防真菌粉红粘帚霉Clonostachys rosea 67-1中,并由此建立该生防真菌的遗传转化体系.研究结果表明,PEG介质含量、限制性内切酶种类和浓度、质粒形态和反应时间对转化效率具有显著的影响.当质粒经线性化后加入40%PEG3350和20 U HindⅢ,室温下转化10 min时,转化效率可达到30~40 CFU.μg 1质粒DNA.PDA平板上连续培养3代,再转接到潮霉素抗性平板中,获得遗传稳定的转化子.PCR检测、Southern杂交和Real-time PCR检测等证明hph基因已整合到基因组中,且多为单拷贝插入.对随机挑取的50个转化子生长性状的测定结果表明,20%的转化子在PDA培养基中生长较快,12%的转化子产孢水平较高;另有16%~20%的转化子生长缓慢、产孢量减少;还有4%的转化子生长微弱,且无明显产孢现象.上述方法可以成功用于在粉红粘帚霉中引入外源基因,为今后生防粘帚霉高效工程菌株的构建提供了依据.

分类号： S476.1

  • 相关文献

[1]粉红粘帚霉67-1转几丁质酶基因转化子生物学特性及高效工程菌株的筛选. 谢响明,李世东. 2012

[2]棉花枯萎病菌的遗传转化. 张杰,张中鸽,彭于发,陈彩层. 1994

[3]NAA或潮霉素对小麦成熟胚愈伤组织分化的影响. 蒋苏,马鸿翔,魏芳,余桂红. 2012

[4]广谱拮抗菌B96-Ⅱ的分子鉴定及GFP标记. 郝变青,马利平,乔雄梧. 2009

[5]香菇ras和gpd启动子的克隆与功能鉴定. 于晓玲,林俊芳,郭丽琼,王树昌. 2005

[6]聚乙二醇(PEG)介导的甜瓜蔓枯病菌的转化(英文). 任海英,李岗,戚行江,梁森苗,郑锡良. 2013

[7]西瓜尖孢镰刀菌FOV-135的绿色荧光蛋白基因转化. 肖荣凤,朱育菁,李燕丹,黄素芳,刘波. 2009

[8]玉米生长条件对玉米原生质体转化的影响研究. 谢礼,宗娜,赵军. 2014

[9]尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种红色荧光蛋白基因转化. 谢德啸,羊玉花,周端咏,郭立佳,彭军,黄小娟,齐兴柱,黄俊生. 2012

[10]几株尖孢镰刀菌的绿色荧光蛋白基因转化. 黄东杰,彭明,李春强. 2014

[11]列当生防菌Br-2的DsRed红色荧光标记及定殖. 王亚娇,纪莉景,栗秋生,王连生,孔令晓. 2017

[12]粉红粘帚霉67-1厚垣孢子形成与贮存研究. 董佩佩,康涛,孙漫红,李世东,罗明. 2013

[13]粉红粘帚霉菌剂的创制与应用. 孙漫红,李世东,钟增明,郭荣君,孙占斌,马桂珍,张拥华,缪作清,卢晓红,黄英秋,张强,刘天英,王忠玉. 2018

[14]粉红粘帚霉67-1菌株原生质体的形成和再生. 李晶晶,彭志刚,李世东,谢响明. 2006

[15]粉红粘帚菌对核盘菌和立枯丝核菌的菌寄生作用机制研究. 马桂珍,李世东,谢丙炎,张拥华,刘杏忠,吕国忠. 2003

[16]土壤中生防菌粉红粘帚霉67-1的荧光定量PCR检测方法. 李世东,张拥华. 2009

[17]土壤因子对生防真菌粉红粘帚霉67-1消长动态的影响. 王淑芳,李世东,孙漫红,暴增海,付泓润,葛平华. 2013

[18]一株线虫寄生菌的鉴定及其在不同农产品培养基上的培养效果比较. 谢明,张艳军,彭德良,尉文彬. 2016

[19]粉红粘帚霉67-1可湿性粉剂防治番茄灰霉病和大豆菌核病效果评价. 周婷,李世东. 2011

[20]粉红粘帚霉67-1菌株寄生核盘菌研究. 张拥华,高会兰,马桂珍,李世东*. 2004

作者其他论文 更多>>

微信小程序